معلومة

قاعدة شيف في آليات الإنزيم

قاعدة شيف في آليات الإنزيم



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

هل يمكن لقاعدة شيف أن تثبت الحالة الانتقالية وتشكل وسيطًا كما هو الحال في التحفيز التساهمي مع ركيزة في نفس التفاعل؟ في الأساس أنا أتساءل عما إذا كانت قاعدة شيف تخلق رد فعل بينج بونج.


أعتقد أن الإجابة على هذا السؤال هي "نعم" الأكثر تحديدًا. تتقدم جميع ناقلات الأمين تقريبًا عبر آلية بينج بونج حيث تكون قاعدة شيف التي تشتمل على فوسفات البيريدوكسال وسيطًا ملزمًا ، وحيث يتم غالبًا عزل شكل الإنزيم المعدل `` نصف التكرار ''. مثال على ذلك هو أسبارتات أمينوترانسفيراز.

دعنا نذكر أنفسنا أيضًا أن الحالة الانتقالية ليست وسيطًا في مسار التفاعل (في سندات TS هي في طور الانكسار والتشكيل) ، ولكنها قد تشبه واحدة.


A3. التحفيز التساهمي أو النيوكليوفيلي

  • بمساهمة هنري جاكوبوفسكي
  • أستاذ (كيمياء) بكلية القديس بنديكت / ش. جامعة جون

تتمثل إحدى طرق تغيير طاقة تنشيط التفاعل في تغيير آلية التفاعل بطرق تقدم خطوات جديدة ذات طاقة تنشيط أقل. تتمثل الطريقة النموذجية في إضافة محفز نووي الذي يشكل وسيطًا تساهميًا مع المادة المتفاعلة. يمكن بعد ذلك أن يتفاعل محبي النواة الأصلي مع المادة الوسيطة في تفاعل الاستبدال المحب للنيوكليوفيليين. إذا كان المحفز nucleophilic هو nucleophile أفضل من nucleophile الأصلي (عادة الماء) ثم يتم تحفيز التفاعل. عادة ما يتفاعل المحفز nucleophilic و nucleophile الأصلي مع carbonyl C في تفاعل الاستبدال ، مما يؤدي في البداية إلى تكوين وسيط oxyanion رباعي السطوح.

الشكل: تحليل التقسيم النووي بواسطة بيريدين.

إذا تم استخدام أمين كمحفز نووي ، فإن منتج الإضافة الأولي (كاربينولامين) يمكن أن يصبح مجففاً ، لأن الزوج الحر من الإلكترونات على N من المرجح أن يتم مشاركته مع الكربون لتكوين رابطة مزدوجة من الإلكترونات من الأصلي كاربونيل O ، وهو أكثر كهرسلبية من N). يتشكل imine أو قاعدة شيف ، مع pKa حوالي 7.

الشكل: آلية تشكيل قاعدة SCHIFF

يتم بروتونات هذا بسهولة لتكوين N موجب الشحنة في مركز Carbonyl O السابق. هذا بمثابة حوض إلكترون ممتاز لتفاعلات نزع الكربوكسيل لأحماض بيتا كيتو ويوضح نقطة مهمة. يمكن النظر إلى الإلكترونات في التفاعلات الكيميائية على أنها تتدفق من مصدر (مثل مجموعة الكربوكسيل) إلى حوض (مثل الكربونيل النووي المحب للنووية أو N موجب الشحنة في قاعدة شيف).

الشكل: آلية التحليل النووي من قبل أمين - تشكيل قاعدة شيف.

الشكل: تدفق الإلكترون: المصدر المراد غرقه

في قسم لاحق ، سنناقش كيف تستخدم إنزيمات البروتين نفس الاستراتيجيات التحفيزية. يطرح سؤال مثير للاهتمام: ما مقدار بنية البروتين الكبير المطلوب حقًا للتحفيز؟ تم توجيه الكثير من العمل لتطوير محاكيات تحفيز الجزيئات الصغيرة لأنزيمات البروتين الكبيرة. ما مدى صغر حجمه في تقليل حجم البروتين والاستمرار في الحصول على التحفيز. تتمثل إحدى السمات المهمة لتحفيز الإنزيم في أنها تحفز التفاعلات التي يتم فيها إنتاج متماثل واحد فقط. أي أن التوليف حازم. عادة ما يكون هذا نتيجة للإنزيم غير المتماثل (نفسه مراوان) الذي يربط متماثلًا واحدًا فقط كمتفاعل و / أو فرض قيود ستريكية على التفاعلات المحتملة للركيزة المرتبطة. في الآونة الأخيرة ، تم إثبات أن L-Pro وحده يمكن أن يعمل كمحفز غير متماثل في تفاعل تكثيف ألدول.

الشكل: تحليل L-PRO لتكثيف ALDOL: آلية محتملة


إنزيمات فوسفات بيريدوكسال

فوسفات البيريدوكسال (PLP) مشتق من فيتامين ب 6 أو البيريدوكسال. يسبب النقص التشنجات وفقر الدم المزمن والاعتلال العصبي. يساعد في العديد من التفاعلات (محفزة بواسطة الإنزيمات المعتمدة على PLP). يرتبط PLP تساهميًا ببقايا اللايسين في رابط قاعدة شيف (الأديمين). في هذا الشكل ، يتفاعل مع العديد من الأحماض الأمينية الحرة (كركائز) ليحل محل قاعدة شيف إلى Lys من الإنزيم بقاعدة شيف إلى ركيزة الأحماض الأمينية. أولا مراجعة لتشكيل قاعدة شيف.

PLP: الهيكل والتعلق التساهمي بالإنزيم

للتفاعلات 6-8 ، افترض أن ركيزة الأحماض الأمينية موجودة في قاعدة شيف مع PLP.

كتب ويليام جينكس في نصه الكلاسيكي ، الحفز في الكيمياء:

& quot؛ لقد قيل أن الله خلق كائنًا حيًا تم تكييفه خصيصًا لمساعدة عالم الأحياء في العثور على إجابة لكل سؤال حول فسيولوجيا الأنظمة الحية إذا كان الأمر كذلك ، يجب الاستنتاج أن فوسفات البيريدوكسال تم إنشاؤه لتوفير الرضا والتنوير لهؤلاء علماء الإنزيمات و الكيميائيين الذين يستمتعون بدفع الإلكترونات ، حيث لا يشارك أي أنزيم آخر في مثل هذه المجموعة المتنوعة من التفاعلات ، في كل من أنظمة الإنزيم والنموذج ، والتي يمكن تفسيرها بشكل معقول من حيث الخصائص الكيميائية للأنزيم المساعد. أصبحت معظم ردود الفعل هذه ممكنة من خلال ميزة هيكلية مشتركة. أي أن سحب الإلكترون باتجاه ذرة النيتروجين الموجبة للإيمين وإلى حوض الإلكترون لحلقة البيريدوكسال من ذرة كربون ألفا للحمض الأميني المرفق ينشط جميع البدائل الثلاثة لهذا الكربون للتفاعلات التي تتطلب سحب الإلكترون من هذه الذرة . & مثل

النمذجة الجزيئية: PLP: Tyrosine Aminotransferase Jmol (من PDB)

6. نوع RX - وألفا - نزع الكربوكسيل من الأحماض الأمينية.

7. نوع RX - القضاء على بيتا من سيرين. مثال: سيرين ديهيدراتاز. (تلميح: قم بإزالة H on & alpha-C أولاً) ، ثم OH)

8. RX TYPE - تخلص من الأحماض الأمينية. (تلميح: قم بإزالة H on & alpha-C أولاً)

تعمل إنزيمات PLP أيضًا على تحفيز تفاعلات النقل ، ومثال على ذلك موضح أدناه:

حمض أميني 1 + وحمض ألفا كيتو 1 & lt == & gt & alpha-keto acid 2 + Amino Acid 2 على سبيل المثال:

First Asp ، المرتبط بـ PLP من خلال رابط قاعدة Schiff ، يفقد & alpha-H ، ويشكل كيتيمين من خلال تفاعلات توتوميراتيزيشن ، والتي تتحلل في النهاية لتشكيل oxalacetate و pyridoxamine المنطلق. يتفاعل pryidoxamine مع & alpha-ketoglutarate في عكس التفاعلات الثلاثة الأولى لـ Glu.

9. RX TYPE - ACETYLATION: إن & quot؛ أنهيدريد & quot من تفاعلات الأستلة البيولوجية هو acetyl-CoA ، وهو مشتق من حمض البانتاثنيك فيتامين ، والذي يحتوي على ثيول حر. يتم أسيتيله في الثيول في العديد من التفاعلات الأيضية لإنتاج acetylCoA الذي يحتوي على رابطة thioester ، وهو كاشف أسيتيل بيولوجي. يمكن شق هذا الجزيء بطريقة طاردة للطاقة ويرجع ذلك جزئيًا إلى الرابطة الضعيفة بين الأسيتيل C و Sk مما يؤدي إلى نقل مجموعة الأسيتيل. لقد ناقشنا سابقًا أهمية هيستون Lys acetylation بواسطة هيستون أسيتيلاز في التحكم في التعبير الجيني.


هيكل وآلية عائلة فرعية من الإنزيمات المتعلقة بـ N-acetylneuraminate lyase.

نصف هنا عائلة فرعية من الإنزيمات المرتبطة من الناحية الهيكلية والوظيفية بـ N-acetylneuraminate lyase. لقد عرف عضوان من هذه العائلة (N-acetylneuraminate lyase و dihydrodipicolinate synthase) هياكل ثلاثية الأبعاد وننتقل الآن إلى إظهار علاقتهما الهيكلية والوظيفية ببروتينين إضافيين ، وهما trans-o-hydroxybenzylidenepyruvate hydratase-aldolase و D-4-deoxy -5-أوكسوجلوكاراتيز ديهيدراتاز. يُعتقد أن جميع هذه الإنزيمات تنطوي على تكوين قاعدة شيف وسيطة مع ركائزها الخاصة. من أجل فهم طبيعة هذا الوسيط ، حددنا البنية ثلاثية الأبعاد لـ N-acetylneuraminate lyase في مركب مع hydroxypyruvate (نظير منتج) ومعقد مع أحد منتجاته (البيروفات). من هذه الهياكل نستنتج وجود نموذج تشكيل لقاعدة شيف متشابهة في جميع أعضاء عائلة N-acetylneuraminate lyase الفرعية. تم تأكيد وجود بروتين خامس ، MosA ، على أنه عضو في العائلة الفرعية على الرغم من أن مشاركة قاعدة شيف وسيطة في تفاعلها المقترح غير واضح.


آلية تفاعل الغليكوزيلاز مع إنزيم إصلاح ختان القاعدة hOGG1: تأثير منسق لـ Lys249 و Asp268 أثناء استئصال 8-oxoguanine

تمت دراسة استئصال 8-oxoguanine (oxoG) بواسطة الإنسان 8-oxoguanine DNA glycosylase 1 (hOGG1) باستخدام إنزيم إصلاح الختان الأساسي QM / MM (M06-2X / 6-31G (d ، p): OPLS2005) طريقة الحساب والتحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي. تضمن تفاعل glycosylase المحسوب استئصال قاعدة oxoG ، وتشكيل Lys249-ribose إنزيم الركيزة التقريب التساهمي وتشكيل قاعدة شيف. كان تكوين قاعدة شيف مع ΔG # = 17.7 كيلو كالوري / مول هو الخطوة المحددة لمعدل التفاعل. تم إجراء استئصال قاعدة oxoG مع ΔG # = 16.1 kcal / mol عن طريق استبدال الرابطة C1΄-N9 N-glycosidic برابطة H-N9 حيث تم تعويض الشحنة السالبة على قاعدة oxoG والشحنة الموجبة على الريبوز بطريقة منسقة بواسطة NH3 + (Lys249) و CO2- (Asp268) ، على التوالي. تم توضيح تأثير Asp268 على استئصال oxoG مع 1H NMR لـ WT hOGG1 و hOGG1 (D268N) متحولة: تم قمع استئصال oxoG بشكل ملحوظ عندما تم تحور Asp268 إلى Asn. تم ترشيد فقدان وظيفة استئصال القاعدة من خلال حسابات QM / MM وتم تأكيد Asp268 باعتباره المثبت الكهروستاتيكي لأوكسوكاربينيوم الريبوز من خلال خطوة استئصال القاعدة الأولية لإصلاح الحمض النووي. توضح تجارب NMR وحسابات QM / MM باستمرار تفاعل استئصال القاعدة الذي يتم تشغيله بواسطة hOGG1.

© المؤلف (المؤلفون) 2017. تم النشر بواسطة مطبعة جامعة أكسفورد بالنيابة عن أبحاث الأحماض النووية.

الأرقام

إنزيم hOGG1 BER. رسم…

إنزيم hOGG1 BER. رسم تخطيطي للنموذج الهيكلي QM / MM بما في ذلك hOGG1 (سماوي) ...

الهندسة المحلية لـ ...

الهندسة المحلية للقلب الحفاز المحسوبة للحالات الثابتة لـ ...

الرسم البياني الكيميائي ( أ…

الرسم البياني الكيميائي ( أ ) وملف تعريف الطاقة الحرة ( ب ) من…

الوظيفة التحفيزية لـ WT ...

الوظيفة التحفيزية لكل من WT hOGG1 و hOGG1 (D268N). مفهوم الفحص من أجل ...

الطاقة الكامنة ثنائية الأبعاد المحسوبة بواسطة QM / MM ...

أسطح الطاقة الكامنة ثنائية الأبعاد المحسوبة بواسطة QM / MM لاستئصال قاعدة oxoG مع ...

ملخص لرد فعل استئصال القاعدة ...

ملخص لتفاعل استئصال القاعدة مع hOGG1: توافق البقايا المشحونة في ...


الملخص

يحفز هيدرولاز فسفونواسيتالديهيد (فسفوناتاز) التحلل المائي للفوسفونو أسيتالدهيد إلى أسيتالديهيد وفوسفات غير عضوي. في هذه الدراسة ، جينات ترميز الفوسفوناتاز في عصية سيريس و في السالمونيلا تيفيموريوم تم استنساخها للتعبير عالي المستوى في الإشريكية القولونية. تم تحديد الخصائص الحركية للفسفوناتاز المنقى المؤتلف. آلية قاعدة شيف المعروف أنها تعمل في B. cereus تم التحقق من إنزيم لـ S. التيفيموريوم إنزيم بواسطة phosphonoacetaldehyde - تثبيط ناتج عن بوروهيدريد الصوديوم وعن طريق الطفرات الموجهة بالموقع لليسين المحفز 53. تسلسل البروتين المستنتج من B. cereus تم تحديد جين phosphonatase ، وتم استخدام هذا التسلسل مع ذلك من س. التيفيموريوم تسلسل الجينات phosphonatase للبحث في قواعد بيانات التسلسل الأساسي عن المتماثلات الهيكلية المحتملة. وجدنا أن الفوسفوناتاز ينتمي إلى عائلة جديدة من hydrolases والتي يبدو أنها تستخدم بقايا الأسبارتات في موقع نشط ومحفوظة للغاية في التحفيز التساهمي. على أساس هذه النتيجة والمسار الكيميائي المجسم المعروف للتحلل المائي المحفز بالفوسفوناتاز في الفوسفور (الاحتفاظ) ، نقترح آلية تتضمن تكوين قاعدة شيف مع ليسين 53 متبوعًا بنقل الفوسفوريل إلى الأسبارتات (في الموضع 11 في S. التيفيموريوم إنزيم والموقع 12 في B. cereus phosphonatase) وآخر تحلل مائي في imine C (1) و acyl phosphate phosphorus.

تم دعم هذا العمل من قبل NIH Grants GM-36360 (D.D.-M.) و GM-35392 (B.L.W.) ووزارة الطاقة Grant DE-FG03-96ER62269 (P.C.B.).

العنوان الحالي: قسم علم الأحياء الدقيقة ، جامعة إلينوي ، أوربانا ، إلينوي 61801-3704.

المعاهد الوطنية للصحة.

المؤلف المراسل. البريد الإلكتروني: [email & # 160protected] الهاتف: (505) 277-3383. فاكس: (505) 277-6202.


قاعدة شيف في آليات الإنزيم - علم الأحياء

لقطة بيانات تجريبية

  • الطريقة: & nbspحيود الأشعة السينية
  • القرار: نبسب1.85 Å
  • R-Value Free: & nbsp0.187 نبسب
  • R- قيمة العمل: & nbsp0.149 نبسب
  • R- القيمة المرصودة: & nbsp0.149 نبسب

التحقق من صحة wwPDBونبسب ونبسبتقرير ثلاثي الأبعاد وتقرير كامل

آلية تشكيل قاعدة شيف الفركتوز -1،6-ثنائي فوسفات ألدولاز: التحليل الهيكلي لوسطاء التفاعل.

(2005) الكيمياء الحيوية & نبسب44: 4222-4229

  • PubMed: & nbsp15766250 & nbsp ابحث في PubMed
  • DOI: & nbsp10.1021 / bi048192o
  • الاقتباس الأساسي من الهياكل ذات الصلة: & nbsp
    2 سنة ، 1W8S
  • ملخص PubMed: & nbsp

يحفز إنزيم الفركتوز -1،6-ثنائي فوسفات الألدولاز (FBPA) الانقسام القابل للانعكاس للفركتوز 1،6-بيسفوسفات إلى جليسيرالديهيد 3-فوسفات وثنائي هيدروكسي أسيتون فوسفات. تحفيز تشكيل قاعدة شيف من الفئة الأولى يعتمد FBPA على عدد من الوسائط المرتبطة تساهميًا باللايسين الحفاز.

يحفز إنزيم الفركتوز -1،6-ثنائي فوسفات الألدولاز (FBPA) الانقسام القابل للانعكاس للفركتوز 1،6-بيسفوسفات إلى جليسيرالديهيد 3-فوسفات وثنائي هيدروكسي أسيتون فوسفات. تحفيز تشكيل قاعدة شيف من الفئة الأولى يعتمد FBPA على عدد من الوسائط المرتبطة تساهميًا باللايسين الحفاز. باستخدام طفرات الموقع النشطة لـ FBPA I من Thermoproteus tenax ، قمنا بحل الهياكل البلورية للإنزيم المرتبطة تساهميًا بالكاربينولامين في ركيزة الفركتوز 1.6-bisphosphate وغير مرتبطة بشكل غير تساهمي بالشكل الدوري للركيزة. تمثل الهياكل ، المحددة بدقة 1.9 أ والمُحسَّنة إلى عوامل R البلورية 0.148 و 0.149 ، على التوالي ، أول منظر لأي FBPA I في هاتين المرحلتين من مسار التفاعل وتسمح بتحليل مفصل لأدوار بقايا الموقع النشطة في الحفز. تدعم هندسة الموقع النشط لمتغير Tyr146Phe FBPA مع وسيط carbinolamine الفكرة القائلة بأن FBPA I Tyr146 هو المتبرع بالبروتون الذي يحفز التحويل بين الكاربينولامين وقاعدة شيف. علاوة على ذلك ، يشير تحليلنا الهيكلي إلى أن Glu187 هو المتبرع بالبروتون في حقيقيات النوى FBPA I ، في حين أن حمض الأسبارتيك ، المحفوظ في جميع إنزيمات FBPA I ، في وضع مثالي ليكون القاعدة العامة التي تسهل انقسام الكربون والكربون. يمثل التركيب البلوري لـ Trp144Glu ، Tyr146Phe معقد الركيزة المزدوج الطافرة المثال الأول حيث يكون الشكل الدوري من بيتا فركتوز 1.6-بيسفوسفات مرتبطًا بشكل غير تساهمي بـ FBPA I. وهكذا يسمح الهيكل لأول مرة بآلية التحفيز للحلقة الافتتاح ليتم تفكيكه.


المقدمة

يعد إصلاح الحمض النووي التالف ضروريًا للحفاظ على سلامة الجينوم ، ويتم التخلص من قواعد الحمض النووي التالفة باستخدام إنزيمات إصلاح استئصال القاعدة (BER) (1-5). يتم تشغيل استئصال القاعدة التالفة والقطع من حبلا DNA الذي يتضمن موقعًا أساسيًا بواسطة إنزيمات BER ثنائية الوظيفة داخل glycosylase وتفاعل-lyase اللاحق ، على التوالي (6). يعتبر استئصال قاعدة الحمض النووي التالف هو الخطوة الأولى التي لا رجعة فيها في مسار الإصلاح الذي يبدأ عند تكوين معقد الإنزيم - الحمض النووي الذي يتضمن إعادة الترتيب الهيكلي لشريط الحمض النووي التالف (الشكل 1 أ) (7-9).

إنزيم hOGG1 BER. رسم تخطيطي للنموذج الهيكلي QM / MM بما في ذلك hOGG1 (سماوي) والحمض النووي المحتوي على oxoG (الأحمر) المشتق من البنية البلورية 2NOZ (33) (أ). التركيب الكيميائي للجوانين (G) ، oxoG ، Lys249 و Asp268 في WT hOGG1 و Asn268 في متحولة hOGG1 (D268N) (ب). تفاصيل النواة الحفازة قبل استئصال oxoG في 2NOZ (أصفر) وفي المتفاعل المحسن QM / MM (ملون الذرة) (ج). تفاصيل النواة الحفازة بما في ذلك المقبض التساهمي Lys249-ribose مع حلقة مفتوحة من السكر في بلورة 1HU0 (34) (أصفر) وفي منتج التفاعل المحسوب بواسطة QM / MM (الحالة الثابتة P + 1) الذي يصف قاعدة شيف (ملون الذرة ) (د).

إنزيم hOGG1 BER. رسم تخطيطي للنموذج الهيكلي QM / MM بما في ذلك hOGG1 (سماوي) والحمض النووي المحتوي على oxoG (الأحمر) المشتق من البنية البلورية 2NOZ (33) (أ). التركيب الكيميائي للجوانين (G) ، oxoG ، Lys249 و Asp268 في WT hOGG1 و Asn268 في متحولة hOGG1 (D268N) (ب). تفاصيل النواة الحفازة قبل استئصال oxoG في 2NOZ (أصفر) وفي المتفاعل المحسن QM / MM (ملون الذرة) (ج). تفاصيل النواة الحفازة بما في ذلك المقبض التساهمي Lys249-ribose مع حلقة مفتوحة من السكر في بلورة 1HU0 (34) (أصفر) وفي منتج التفاعل المحسوب بواسطة QM / MM (الحالة الثابتة P + 1) الذي يصف قاعدة شيف (ملون الذرة ) (د).

العامل الأساسي الذي يؤدي إلى تراكم طفرات الحمض النووي هو الإجهاد التأكسدي. oxoG ، الذي ينشأ من جوانين التالفة التأكسدية (G) ينتمي إلى آفات الحمض النووي الأكثر وفرة والأكثر خطورة (الشكل 1 ب) (10-12). يتسبب OxoG في حدوث عيوب خطيرة في الكائنات الحية ، كما أن إزالته المستمرة أمر بالغ الأهمية للتخلص من النتائج غير المرغوب فيها لعمليات الجهاز التنفسي القاعدية التي تحدث عادةً في الخلايا (13). على النقيض من ذلك ، يُفترض أن الإغلاق المتحكم فيه لإصلاح oxoG في الخلايا السرطانية يكون علاجيًا في العلاجات المتقدمة المضادة للسرطان (14).

يتطلب تفاعل glycosylase الذي تديره إنزيمات BER التنشيط للتغلب على حاجز الطاقة لانقسام رابطة N-glycosidic. يؤدي إمداد ما يصل إلى 19 كيلو كالوري / مول إلى تسريع انقسام الرابطة 10 14 ضعفًا (4). جميع إنزيمات BER هي عادةً خاصة بالآفات وهذا ينطبق بشكل خاص على hOGG1 ، الذي يعمل ضد oxoG بخصوصية مذهلة (15-28). على الأرجح لا يمكن أن يحدث سوء سلوك hOGG1 ، لأن نقطة التفتيش التحفيزية تمنع حتى اقتلاع G التي يتم إدخالها قسراً في الموقع الحفاز (29). يحدث إدخال oxoG في الموقع الحفاز أسرع بكثير من إعادة الترتيب اللاحقة للنواة الحفازة (30). يمكن لمثبط hOGG1 الذي يمكنه محاكاة ركائز حقيقية أن يصبح عاملًا علاجيًا ضد أنواع معينة من السرطان (31).

تم الكشف عن بنية النواة الحفازة hOGG1 بواسطة مجموعة Verdine.أولاً ، كشفوا عن الأساس الآلي للتعرف على oxoG واستئصاله باستخدام متحولة hOGG1 (K249Q) غير النشطة ، حيث تم استبدال Lys249 بـ Gln (8). في وقت لاحق ، أظهروا أن Asp268 هو بقايا تحفيزية رئيسية أخرى باستخدام متحولة hOGG1 (D268N) حيث تم استبدال Asp268 بـ Asn (الشكل 1B) (32). قادتنا هذه النتائج إلى التركيز على Lys249 و Asp268 في عملنا. من المفترض أن يكون Gly42 ، الموضح أيضًا في الشكل 1 ب ، مسؤولاً عن التعرف على oxoG وترسبه بشكل صحيح داخل النواة الحفازة بواسطة قوة رابطة الهيدروجين مع H7 (oxoG) (29).

تم التقاط بنية النواة الحفازة hOGG1 ، قبل استئصال oxoG مباشرة ، في بلورة 2NOZ (الشكل 1C). تم افتراض العديد من آليات تفاعل الغليكوزيلاز لحالات بروتون مختلفة لـ Asp268 و Lys249 لأن الأشكال الفعلية غير معروفة حاليًا. كو2 - تم افتراض (Asp268) لضمان الاستقرار الكهروستاتيكي لكاتيون oxocarbenium على الريبوز أثناء تمزق الرابطة N-glycosidic ، حيث تم كبح طفرة Asp268 إلى Asn بشكل ملحوظ وظيفة متحولة hOGG1 (D268N) (32 ، 35). أما بالنسبة لـ Lys249 ، فإن القرب المماثل لنيتروجين النيتروجين من ذرات N3 و N9 و C1΄ من oxoG (الشكل 1B) ، الذي لوحظ في البلورات ، يشير إلى مجموعة متنوعة من تفاعلات استئصال القاعدة. نيو هامبشاير3 + (Lys249) يمكن أن يثبّت الشحنة السالبة على قاعدة oxoG المتبقية ، بينما NH2(Lys249) يمكن أن يثبّت كاتيون أوكسوكاربينيوم على السكر. تم افتراض تفاعلات الختان الأساسي (6 ، 23 ، 32 ، 34 ، 36 ، 37). تسببت طفرة Lys249 إلى Cys أو Gln في فقدان الوظيفة التحفيزية لـ hOGG1 ثنائية الوظائف (8 ، 34 ، 37). تشكل Lys249 قاعدة شيف مع ريبوز الموقع الجهوي بعد استئصال oxoG (8). تم التقاط المقرب التساهمي Lys249-ribose ، المتولد من قاعدة شيف عند إضافة عامل الاختزال ، في بلورة 1HU0 (34). الأهم من ذلك ، يمكن استخدام الأشكال الهندسية للمادة المتفاعلة والمنتج الذي تم التقاطه في البلورات من أجل النمذجة النظرية الموثوقة لتفاعل الجليكوزيلاز (الشكل 1C و D).

إن التعويض عن الرسوم النامية داخل جزيء الركيزة بواسطة البقايا التحفيزية الرئيسية هو استراتيجية إنزيم نموذجية (38). تم النظر في هذه الاستراتيجية العامة في الحسابات النظرية لتفاعلات استئصال القاعدة التي يديرها hOGG1 في عدد من الدراسات. تأثير NH2(Lys249) على كاتيون أوكسوكاربينيوم الريبوز تمت مقارنته مع تأثيرات محبي نيوكليوفيل أخرى (39 ، 40). الهجرة المتتالية للبروتون من NH3 + (Lys249) إلى O8 (oxoG) ثم إلى O4΄ من الريبوز قام بتنشيط فتح حلقة الريبوز واستئصال قاعدة oxoG (41). الهجوم المتزامن NH2(Lys249) إلى C1΄ (ريبوز) و CO2نتج عن H (Asp268) إلى O4΄ (ريبوز) حلقة مفتوحة من oxoG ribose والاستئصال اللاحق لقاعدة oxoG (آلية Ribose-protonated). تم اقتراح آلية مماثلة لفتح حلقة السكر لركيزة نوكليوزيد مع نوكلياز داخلي III-DNA (43). تفاعل الكاتيون بين الحلقة العطرية لقاعدة oxoG و NH3 + (Lys249) بدأ نقل البروتون من NH3 + (Lys249) إلى N3 (oxoG) ، مما أدى إلى تنشيط تفاعل استئصال القاعدة (44 ، 45). أخيرًا ، تجريد البروتون من NH3 + (Lys249) مع ذرة N9 (oxoG) تسببت في استبدال الرابطة N-glycosidic لـ oxoG مع الرابطة N9-H بطريقة متزامنة منسقة (آلية استبدال الرابطة σ) (46).

توضح الدراسات السابقة بوضوح التأثير الرئيسي لـ Lys249 و Asp268 على الوظيفة التحفيزية لـ hOGG1. كما ذكرنا ، فإن حالات البروتون للمتبقيين غير معروفة حاليًا ، وبالتالي فإن وظيفة هذه البقايا أثناء تفاعل الجليكوزيلاز غامضة. ومع ذلك ، فإن قيم pKa النموذجية للسلاسل الجانبية Lys و Asp تشير إلى NH المحتمل3 + (Lys249) و CO2 - نماذج (أسب 268) عدد (47). في ظل هذا الافتراض ، من المفترض أن يعوض Lys249 الشحنة السالبة على قاعدة oxoG المتبقية ويعوض Asp268 الشحنة الأولية على أوكسوكاربينيوم الريبوز. تم اقتراح تفاعل استبدال السندات σ الذي يتوافق مع هذه الافتراضات سابقًا ، بافتراض تأثير Lys249 (46) فقط. في العمل الحالي ، سيتم توضيح تفاعل الختان الأساسي مع hOGG1 داخل قلب حفاز كامل من خلال استخدام طريقة حساب QM / MM. سيتم تناول وظيفة Asp268 بشكل خاص. من المعروف أن بقايا Asp محفوظة جيدًا داخل عائلة OGG من إنزيمات BER ومع ذلك ، لا تزال الوظيفة غير واضحة (4). حددت قياسات الرنين المغناطيسي النووي (NMR) التي تستخدم WT hOGG1 و hOGG1 (D268N) متحولة في هذا العمل أي من وظائف hOGG1 ثنائية الوظائف تتأثر بالفعل بطفرة D268N. قدمت تجارب NMR وحسابات QM / MM صورة متماسكة لتفاعل استئصال القاعدة داخل تفاعل الجليكوزيلاز الذي يعمل بواسطة إنزيم hOGG1 BER.


الملاحظة الأولى لتحول إنزيم يحفز تفاعلين كيميائيين

الشكل 2. إجمالي هيكل ثلاثي الأبعاد من FBPA / P. تتجمع ثماني وحدات متطابقة لتشكيل هيكل يشبه البرميل. يتم تمثيل كل وحدة باستخدام لون قزحي الألوان (أزرق ، أزرق فاتح ، أخضر ، أخضر مصفر ، برتقالي ، وأحمر). تُصوَّر قواعد DHAP المربوطة وأيونات المغنيسيوم على شكل كرات أرجوانية ووردية ، على التوالي.

كان البروفيسور تاكايوشي واكاجي والبروفيسور المشارك شينيا فوشينوبو من كلية الدراسات العليا للعلوم الزراعية والحيوية وجامعة طوكيو وزملاؤه أول من أوضح كيف يمكن أن يحفز إنزيم من أصل عتيق شديد الحرارة يُعتقد أنه يقع بالقرب من أصل الحياة. تفاعلين أثناء تحويل نفسه.

تمتلك الأركيا العديد من الإنزيمات غير العادية. من بينها الفركتوز -1،6-ثنائي الفوسفات (FBP) ألدولاز / فوسفاتيز غريب بشكل خاص. في انتهاك واضح لقوانين الكيمياء الحيوية ، يحفز هذا الإنزيم تفاعلين كيميائيين مختلفين اختلافًا جوهريًا. بالإضافة إلى ذلك ، فإن هذا الإنزيم مسؤول عن التخليق الحيوي للجلوكوز ، وهي عملية ذات أهمية حاسمة في المرحلة المبكرة من تطور الحياة.

استخدم فريق البحث مصنع الفوتون في KEK لمراقبة التحولات الهيكلية للإنزيم & # 146s لإحداث تحفيز للتفاعلين المختلفين. إن مثل هذا الإنزيم متعدد الوظائف يحطم المعتقدات الراسخة في الكيمياء الحيوية ويثير احتمالًا مثيرًا للاهتمام بأنه يمكن اكتشاف المزيد من هذه الإنزيمات في الكائنات الحية الأخرى.

يعيش محبو الحرارة المفرطة في الماء شديد السخونة ويتم وضعهم بالقرب من جذر شجرة الحياة التطورية. على هذا النحو ، يُعتقد أنهم قريبون من السلف المشترك للحياة على الأرض. يتم تصنيف العديد من الأشخاص الذين يعانون من فرط الحرارة على أنهم عتائق ، والتي تنتمي إلى فروع مختلفة من تلك الموجودة في الكائنات الحية الشائعة ، مثل البكتيريا وحقيقيات النوى. بعض العتائق شديدة الحرارة لديها القدرة على بناء أجسامها عن طريق تخليق مركبات معقدة من مواد غير عضوية بسيطة ، على سبيل المثال في التخليق الحيوي للسكريات من ثاني أكسيد الكربون. يُعتقد أن مسارات التفاعل التي تصنع فيها الكائنات الحية الجلوكوز مهمة في تطور الكائنات الحية البدائية.

الشكل 3. التفاعلات التي يتم تحفيزها بواسطة FBPA / P (على اليسار) ووجهات النظر التخطيطية للمناطق التي تحدث فيها التفاعلات (على اليمين). تخضع ثلاث حلقات لتغييرات توافقية كبيرة في التغيير بين شكل FBP aldolase (أعلى اليمين) وشكل FBP phosphatase (أسفل اليمين).

بالنسبة لمعظم الكائنات الحية الأكثر شيوعًا ، فإن إنزيمين مختلفين ، الفركتوز -1،6-ثنائي فوسفات (FBP) ألدولاز و FBP فوسفاتيز ، هما المسؤولان بالتتابع عن التفاعلات الكيميائية التي تؤدي إلى إنتاج الجلوكوز. على النقيض من ذلك ، تستفيد العتائق شديدة الحرارة من بروتين واحد ، يُسمى FBP aldolase / phosphatase (FBPA / P) ، لتحفيز هذين التفاعليين. يمكن القول أن هذا الإنزيم ثنائي الوظيفة.

درس فريق البحث FBPA / P الموجود في الأركيون شديد الحرارة ، Sulfolobus ، المعزول من الماء الساخن في Beppu Onsen في محافظة Oita ، اليابان. يشبه الهيكل ثلاثي الأبعاد لـ FBPA / P برميل من ثماني وحدات جزيئية متطابقة. يتم تحفيز التفاعلات في المناطق الواقعة بين هذه الوحدات.

التفاعلين اللذان يحفزان FBPA / P هما: 1) تفاعل FBP aldolase ، حيث ينتج فوسفات ثنائي هيدروكسي أسيتون (DHAP) وغليسيرالديهيد -3 فوسفات (GA3P) FBP و 2) تفاعل فوسفاتيز FBP ، حيث يتم شق FBP في فركتوز -6 - الفوسفات (F6P) والفوسفات غير العضوي (Pi).

في عام 2004 ، أوضح فريق البحث البنية ثلاثية الأبعاد لمركب الركيزة الإنزيمية بينما يقوم FBPA / P بتحفيز تفاعل فوسفاتيز FBP. في هذه الدراسة ، نجحت نفس المجموعة في كشف الشكل ثلاثي الأبعاد لمركب الركيزة الإنزيمية بينما يقوم FBPA / P بتحفيز تفاعل FBP aldolase باستخدام علم البلورات بالأشعة السينية في تجاربهم التي أجريت على خط الأشعة AR-NW12A من مصنع الفوتون KEK & # 146s. كشفت المقارنة بين هذين الشكلين أن الموقع النشط (منطقة الإنزيم الذي يتم فيه تحفيز تفاعل كيميائي) من FBPA / P يتحول إلى شكلين مختلفين تمامًا بسبب الحركات الواسعة لثلاث حلقات (حلقة الغطاء ، حلقة قاعدة شيف ، وحلقة C- طرفية).

في شكل FBP aldolase ، ترتبط بقايا اللايسين (K232) بالركيزة الأولى ، DHAP. عندما تدخل الركيزة الثانية ، GA3P ، إلى المركز النشط ، يُعتقد أن بقايا التيروزين المجاورة (Y229) تتوسط تفاعل GA3P و DHAP في FBP (تفاعل FBP aldolase). بمجرد إنتاج FBP ، تصبح بقايا اللايسين حرة ويمكن أن تتحرك الحلقات الثلاث. تنقلب حلقة قاعدة شيف ويغلق كل من الحلقات الطرفية والغطاء ، وتحول الإنزيم إلى شكل فوسفاتيز FBP. بعد ذلك ، تدخل بقايا الأسبارتات (D233) إلى المركز النشط ، وتربط أيونات المغنيسيوم ، مما يؤدي إلى تفكك FBP إلى F6P و Pi (تفاعل فوسفاتيز FBP).

كشفت هذه النتيجة أن مثل هذا & # 145 metamorphosis & # 146 هو المفتاح لتحفيز تفاعلين مختلفين لتسلسل تفاعل إنزيمي معين. تعمل هذه الآلية على قلب العقيدة الكيميائية الحيوية الراسخة التي تصف إنزيمًا واحدًا بأنه يحفز تفاعل واحد فقط.

لا تمتلك الكائنات الحية الشائعة من أصل أكثر حداثة FBPA / P ، ولكنها تستخدم إنزيمين مختلفين بشكل منفصل لتحفيز التفاعلين بشكل مستقل. من الممكن أن تقوم الكائنات البدائية بالتخليق الحيوي بطريقة أبسط من الكائنات الحية المعاصرة من خلال استخدام إنزيمات ثنائية الوظيفة مثل FBPA / P.

الدراسة الحالية هي الأولى التي تكشف عن الآلية التي يمكن من خلالها للأنزيم أن يحفز تفاعلين كيميائيين مختلفين. علاوة على ذلك ، تشير النتائج الحالية إلى احتمال وجود المزيد من الإنزيمات متعددة الوظائف المشابهة لـ FBPA / P. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن توقع اكتشاف المزيد من الإنزيمات القادرة على تحويل مواد البداية البسيطة إلى مواد وسيطة مفيدة صناعياً.


قاعدة جديدة Thiazolyl Schiff: تأثيرات مضادة للجراثيم ومضادة للفطريات و في المختبر تعديل الإجهاد التأكسدي على الخلايا البطانية البشرية

قواعد شيف (SBs) هي مركبات كيميائية تعرض إمكانات دوائية كبيرة. إنها قادرة على تعديل نشاط العديد من الإنزيمات المشاركة في التمثيل الغذائي وتوجد بين الأدوية المضادة للبكتيريا والفطريات والالتهابات ومضادات الأكسدة ومضادات التكاثر. تم الحصول على ثيازوليل تريازول إس بي جديد وتميز بالتحليل الأولي والطيفي. تم تقييم القدرة المضادة للبكتيريا والفطريات في SB ضد البكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام وضد ثلاثة الكانديدا سلالات. أظهر SB نشاطًا جيدًا مضادًا للبكتيريا L. monocytogenes و P. الزنجارية كان أكثر نشاطا بمرتين من سيبروفلوكساسين. مضاد-الكانديدا كان النشاط أعلى مرتين مقارنة مع فلوكونازول. تم تقييم تأثير SB على حيوية الخلية عن طريق القياس اللوني على ثقافات الخلايا المعرضة لتركيزات SB المختلفة. تم تقييم قدرة SB على تعديل الإجهاد التأكسدي عن طريق قياس MDA ، TNF-αو SOD1 و COX2 و NOS2 في المختبر، باستخدام مزارع الخلايا البطانية البشرية المعرضة لوسط غني بالجلوكوز. لم يغير SB مورفولوجيا الخلايا. تشير النتائج التجريبية إلى أن قاعدة شيف المصنعة حديثًا لها نشاط مضاد للجراثيم ، خاصة على سالبة الجرام P. الزنجارية، والنشاط المضاد للفطريات. أظهر SB أيضًا أنشطة مضادة للأكسدة ومضادة للالتهابات.

1 المقدمة

تحتوي الكائنات الهوائية على أنظمة دفاع مضادة للأكسدة ضد أنواع الأكسجين التفاعلية- (ROS-) التي يسببها الضرر الناتج في ظروف الإجهاد المختلفة. تشارك أنواع الأكسجين التفاعلية أيضًا في الجهاز المناعي الفطري ولها دور مهم في الاستجابة الالتهابية التي تجذب الخلايا ، عن طريق الانجذاب الكيميائي ، إلى موقع الالتهاب. أكسيد النيتريك (NO) هو جزيء إشارات مهم آخر داخل الخلايا وبين الخلايا يشارك في تنظيم الآليات الفسيولوجية والفيزيولوجية المرضية المتعددة. يعمل كمغير بيولوجي. NO قادر على تنظيم نغمة الأوعية الدموية ويمكن أن يعمل كمستجيب دفاعي مضيف. أيضا ، يمكن أن يكون بمثابة عامل سام للخلايا في الاضطرابات الالتهابية. لا تحفز عائلة إنزيم synthase (NOS) إنتاج NO. قد يكون تثبيط NOS المستحث (iNOS) مفيدًا في سياق علاج بعض الأمراض الالتهابية [1]. التفاعلات بين NO و ROS ، مثل جذور الأكسيد الفائق (O2 ⋅−) ، يؤدي إلى إنتاج جذري مؤكسد قوي (بيروكسينيتريت) ، مما يؤدي إلى حدوث خلل وظيفي في البطانة والميتوكوندريا. الدفاع الخلوي الرئيسي ضد جذور البيروكسيد والبيروكسينيتريت هو ديسموتازات الأكسيد الفائق (SODs) التي تحفز تحويل جذور البيروكسيد إلى بيروكسيد الهيدروجين (H2ا2) ، والذي يتحول بواسطة الكاتلاز إلى ماء وأكسجين جزيئي. أيضًا ، تلعب SODs دورًا مهمًا في منع تكوين البيروكسينيتريت [2]. تحتوي جميع الأشكال الإسوية في موقعها الحفاز على معدن انتقالي ، مثل النحاس والمنغنيز [3].

أظهرت الدراسات الحديثة أن أكسيد النيتروجين الخارجي ، الذي تنتجه البكتيريا NOS ، يحمي البكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام (الزائفة الزنجارية, المكورات العنقودية الذهبية، إلخ) ضد الإجهاد التأكسدي ويزيد من مقاومة البكتيريا لمجموعة واسعة من المضادات الحيوية [4]. المقاومة الفطرية للعلاج بمضادات الفطريات هي إحدى نتائج ظهور سلالات مقاومة ، ولكن أكثر فأكثر ، في السنوات الأخيرة ، ترجع المقاومة الفطرية إلى قدرة السلالات الفطرية على تكوين الأغشية الحيوية ، والتي تعتبر حاسمة في الالتهابات الفطرية الغازية ، المرتبطة بارتفاع معدل الوفيات. أظهرت بعض الدراسات أن عددًا قليلاً فقط من مضادات الفطريات فعالة ضد الأغشية الحيوية الفطرية. كل منهم لديه القدرة على إحداث تكوين ROS في الخلايا الحيوية الفطرية [5]. في هذا السياق ، يمكن أن يمثل العثور على مواد نشطة بيولوجيًا قادرة على تقليل تخليق NO في البكتيريا أو قادرة على تحفيز تخليق ROS في الأغشية الحيوية الفطرية اتجاهات جديدة في تطوير عقاقير جديدة مضادة للميكروبات. تم العثور على الثيازول والتريازول ومشتقاتهما بين الأدوية المضادة للبكتيريا ومضادات الالتهاب [6-9].

قواعد شيف (SBs) هي هياكل كيميائية لها إمكانات دوائية كبيرة. تحتوي SBs على مجموعة azomethine التي تم الحصول عليها من خلال تكثيف الأمينات الأولية بمركبات الكربونيل [10]. ترجع الإمكانات الصيدلانية لهذه المجموعة إلى قدرتها على تكوين مركبات معقدة مع معادن ثنائية التكافؤ وثلاثية التكافؤ الموجودة في المركز النشط للعديد من الإنزيمات المشاركة في التفاعلات الأيضية. تؤكد العلاقة بين التركيب الكيميائي والنشاط البيولوجي (SAR) على أهمية مجموعة azomethine لتخليق مركبات جديدة ذات أنشطة مضادة للبكتيريا والفطريات وحتى ضد الأورام [11-13].

أظهرت دراسات متعددة قدرة SBs على العمل كعوامل مضادة للتكاثر ومضاد للأورام [14-16]. يتم استخدام حامل الأدوية في Azomethine في تطوير جزيئات نشطة بيولوجيًا جديدة [17]. أثر اكتشاف العقاقير الانتقائية السامة للخلايا على علاج الأورام. ومع ذلك ، لم يتم العثور على إجابات مرضية تمامًا لظهور النقائل. نظرًا لانتشار الورم المتزايد ووجود العديد من خطوط الورم الخلوي المقاومة للعلاج السام للخلايا ، فإن البحث عن عوامل نشطة جديدة له ما يبرره [18 ، 19].

تهدف الدراسة الحالية إلى اختبار SB حلقية غير متجانسة تم تصنيعها حديثًا من حيث النشاط المضاد للميكروبات ضد البكتيريا سالبة الجرام وإيجابية الجرام والتأثيرات المضادة للفطريات ضد الكانديدا سلالات [20 ، 21] ، وكذلك لتقييم التوافق الحيوي لل SB في المختبر على الخلايا البطانية البشرية وقدرة SB على تعديل الإجهاد التأكسدي ، من خلال تقييم الإنزيمات المشاركة في الدفاع الخلوي المضاد للأكسدة.

2. المواد والأساليب

2.1. توليف قاعدة شيف

تم شراء جميع الكواشف والمذيبات المستخدمة من Sigma-Aldrich واستخدمت دون مزيد من التنقية. تم الإبلاغ عن مركب البداية مسبقًا وتم تصنيعه بواسطتنا وفقًا للمنهجيات الموضحة في الأدبيات [21].

تم تصنيع تركيب قاعدة شيف (SB) 4- (3-بروموبنزيليدينيمينو) -5- (4-ميثيل-2-فينيلثيازول-5-يل) -4H-1،2،4-تريازول-3-ثيول باستخدام عام الإجراء (مخطط 1) [21]. تم تعليق 2 مليمول (0.578 جم) من 4-أمينو-5- (4-ميثيل-2-فينيل ثيازول-5-يل) -4H-1،2،4-تريازول-3-ثيول في 10 مل من الإيثانول المطلق. تمت إضافة المعلق الناتج بمحلول كحولي من 2 ملي مول من 3-بروموبنزالديهيد في 5 مل من الإيثانول المطلق و2-3 قطرات من H مركز.2وبالتالي4، كعامل مساعد. تم إعادة تدفق خليط التفاعل لمدة 6 ساعات. تم ترشيح الراسب المتحصل عليه ساخنًا وغسله باستخدام الإيثانول المطلق ، ثم تم تجفيفه وإعادة بلورته من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO).

2.2. فحص مضاد للبكتيريا والفطريات في المختبر
2.2.1. إعداد نموذج الحل

تم حل SB في DMSO ، بتركيز نهائي قدره 100 ميكرومترز / مل. تم تخزين محلول العينة عند 4 درجات مئوية [22 ، 23].

2.2.2. قياسات قطر منطقة التثبيط

تم اختبار نشاط مضادات الميكروبات في المختبر باستخدام طريقة انتشار قرص أجار من خلال قياس أقطار منطقة التثبيط. تم تلقيح صفائح أجار بلقاح معياري للكائنات الدقيقة للاختبار: سلالتان من البكتيريا سالبة الجرام—السالمونيلا المعوية ATCC 14028 و الإشريكية القولونية ATCC 25922 ، سلالتان من البكتيريا موجبة الجرام—الليسترية المستوحدة ATCC 19115 و المكورات العنقودية الذهبية ATCC 49444 ، وسلالة فطرية—المبيضات البيض ATCC 10231. تم استخدام أطباق بتري مع Mueller Hinton Agar (20.0 مل) لجميع الاختبارات البكتيرية. تم استخدام وسيط Mueller-Hinton مع 2 ٪ من الجلوكوز (يوفر نموًا مناسبًا للخمائر) و 0.5 جم / لتر من الميثيلين الأزرق (يوفر تعريفًا أفضل لقطر منطقة التثبيط) لاختبار مضادات الفطريات. تم تشريب كل قرص ورقي بـ 10 ميكرومترلتر من المحلول (100 ميكرومترمركب / قرص). تم وضع أقراص ورق الترشيح على أطباق بتري المصنفة مسبقًا "في طبقة" مع لقاحات السلالة البكتيرية المختبرة. بعد ذلك ، تم الحفاظ على أطباق بتري في درجة حرارة الغرفة لضمان الانتشار المتساوي للمركب في الوسط ، وبعد ذلك ، تم تحضين الأطباق عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. تم قياس مناطق التثبيط بعد 24 ساعة من الحضانة. تم تقييم التأثير المضاد للميكروبات عن طريق قياس قطر منطقة تثبيط النمو. سيبروفلوكساسين (10 ميكرومترز / بئر) وفلوكونازول (25 ميكرومترز / بئر) كما تم استخدام اساسي مضاد للجراثيم ومضاد للفطريات المخدرات. تم استخدام DMSO للمقارنة ، كعنصر تحكم سلبي ، لجميع التجارب ، ولم يثبط نمو الكائنات الحية الدقيقة (

). واعتبرت الهالات الصافية التي يزيد قطرها عن 10 ملم نتائج إيجابية [22 ، 23]. تم إجراء الاختبارات في ثلاث نسخ ، وتم تقديم القيم على أنها

2.2.3. تحديد الحد الأدنى للتركيزات المثبطة (MICs) ، والتركيزات الدنيا مبيد للجراثيم (MBCs) ، والحد الأدنى من تركيزات مبيدات الفطريات (MFCs)

تم تحديد التركيزات المثبطة الدنيا (MICs) ، والتركيزات الدنيا للجراثيم (MBCs) ، والحد الأدنى من تركيزات مبيدات الفطريات (MFCs) بواسطة طريقة تخفيف الآجار. كانت سلالات الكائنات الحية الدقيقة المستخدمة على النحو التالي: السالمونيلا المعوية ATCC 14028 ، الإشريكية القولونية ATCC 25922 ، الليسترية المستوحدة ATCC 19115 ، المكورات العنقودية الذهبية ATCC 49444 ، المبيضات البيض ATCC 10231 ، المبيضات البيض (ATCC 18804) و المبيضات كروسي (ATCC 6258) [22-26]. للتجربة 100 ميكرومترتم وضع مرق المغذيات L في طبق من 96 جيدًا ، ومحلول العينة بتركيز عالٍ (100 ميكرومترجم / مل) في الصفوف الأولى من الأطباق الدقيقة. 10 ميكرومترتم تلقيح L من المستنبتات في جميع الآبار. تم تحضين الأطباق عند 37 درجة مئوية لمدة 16-24 ساعة (48 ساعة للفطريات). تم استخدام العقاقير المرجعية ، سيبروفلوكساسين وفلوكونازول ، بنفس التركيزات.

2.3 تحديد نشاط مضادات الأكسدة بواسطة مقايسة التبييض DPPH (2،2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)

تم إجراء اختبار نشاط مضادات الأكسدة DPPH كما هو موضح سابقًا ، مع تعديل طفيف. تم إذابة SB في DMSO (1 مجم / مل). تم إذابة جذور DPPH في ميثانول (0.25 ملي مولار). تم استخدام أحجام متساوية (1.0 مل) من محلول DPPH الميثاني ومحلول العينة (أو القياسي) في الميثانول بتركيزات مختلفة. تم تحضين المخاليط لمدة 30 دقيقة عند 40 درجة مئوية في حمام ترموستاتي تم قياسه عند 517 نانومتر. تم حساب قدرة الكسح في DPPH على النحو التالي:

، حيث يتم امتصاص جزيء DPPH والميثانول (الذي يحتوي على جميع الكواشف ، باستثناء العينة) وامتصاص خليط جزيء DPPH والعينة. تم رسم منحنى بنسبة ٪ DPPH القدرة على الكسح مقابل التركيز ، و IC50 تم حساب القيم. IC50 القيمة هي تركيز العينة المطلوب لتنظيف 50٪ من الجذور الحرة DPPH. أقل IC50 القيمة ، أقوى قدرة مضادات الأكسدة. وهكذا ، إذا

، تظهر العينة قدرة عالية من مضادات الأكسدة إذا

، فإن العينة لديها قدرة معتدلة من مضادات الأكسدة إذا

، العينة لديها نشاط ضعيف أو لا يوجد نشاط. تم استخدام BHT (هيدروكسي تولوين بوتيل) و trolox (6-هيدروكسي-2،5،7،8-رباعي ميثيل كرومان -2-كربوكسيليك) كعناصر تحكم إيجابية [20 ، 27-30].

2.4 تقييم قدرة SB على تعديل الاستجابة الالتهابية والإجهاد التأكسدي على الثقافات الخلوية
2.4.1. مصدر الخلية

تم استخدام الخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVECs ، Promocell ، هامبورغ ، ألمانيا). نمت الخلايا في وسط RPMI مكملًا بـ 5 ٪ من مصل العجل الجنيني ، 50 ميكرومترجم / مل جنتاميسين ، و 5 نانوغرام / مل أمفوتيريسين (Biochrom Ag ، برلين ، ألمانيا). تم استخدام مزارع الخلايا في الممرات من 13 إلى 15. تم تخفيف SB في DMSO (Biochrom Ag ، برلين ، ألمانيا) للحصول على محلول مخزون قدره 1 مجم / مل. تم استخدام محلول المخزون لإجراء مزيد من التخفيفات في وسط نمو الخلية الكامل ، مباشرة قبل التجارب. كان تركيز DMSO النهائي أقل من 0.05٪ ، وهو تركيز غير سام للخلايا [31].

2.4.2. اختبار جدوى الخلية

تمت تسوية الخلايا المزروعة بكثافة 10 4 / بئر على لويحات ELISA 96 بئر (TPP ، سويسرا) لمدة 24 ساعة ، ثم تعرضت لتركيزات مختلفة من المادة تتراوح من 0.001 إلى 200 ميكرومترز / مل. تم قياس الجدوى من خلال القياس اللوني لمركب ملون - فورمازان ، تم إنشاؤه بواسطة خلايا قابلة للحياة باستخدام مقايسة تكاثر الخلايا غير المشعة CellTiter 96® AQueous (شركة Promega ، ماديسون ، الولايات المتحدة الأمريكية). تمت القراءات عند 540 نانومتر ، باستخدام قارئ لوحة ELISA (Tecan ، Mannedorf ، النمسا). تم عرض النتائج على أنها OD540. تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ. تم استخدام الثقافات غير المعالجة كعناصر تحكم [32].

2.4.3. تصميم تجريبي

تم عمل أربع مجموعات: (1) خلايا تحكم عولجت فقط بمتوسط ​​، (2) خلايا معرضة لوسط عالي الجلوكوز (4.5 جم / لتر) ، (3) خلايا عولجت بـ SB 0.001 ميكرومترجم / مل ، و (4) خلايا تتعرض بشكل متزامن لجلوكوز مرتفع و SB (0.001 ميكرومترز / مل). تم علاج جميع المجموعات لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، تم استخدام الخلايا لتقييم تعديلات الهيكل الخلوي - تلطيخ phalloidin (الفحص المجهري الفلوري) ، الإجهاد التأكسدي (قياس لطخة غربية لـ SOD1 ، COX2 ، NOS2 المحرض والقياس الطيفي لـ MDA) ، والالتهاب (قياس ELISA لـ TNF-α).

2.4.4. تحلل الخلية

تم تحضير محللات الخلية المستخدمة في التجارب التالية كما هو موضح سابقًا [33]. تم تحديد تركيزات البروتين بطريقة برادفورد ، وفقًا لمواصفات الشركة المصنعة (Bio-Rad ، Hercules ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وباستخدام ألبومين المصل البقري كمعيار. لجميع المقايسات ، تم تصحيح المحللين من خلال تركيز البروتين الكلي.

2.4.5. تقييم الإجهاد التأكسدي والالتهابات

تم إجراء القياس الكمي لعلامة malondialdehyde (MDA) لعلامة بيروكسيد الدهون الغشائية بواسطة القياس الطيفي ، كما هو موضح سابقًا [34]. تم شراء جميع الكواشف من Sigma-Aldrich. تم التعبير عن البيانات في صورة نانومتر / ملغ بروتين [35]. بعد اختبار الصلاحية وبعد تقييم مستوى MDA ، عولجت الخلايا المستخدمة في تجارب أخرى بتركيز 0.001 ميكرومترز / مل.

TNF-α تم استخدام مجموعة ELISA المناعية من شركة R & ampD Systems، Inc. (مينيابوليس ، الولايات المتحدة الأمريكية). عولجت المواد الطافية الخلوية وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة ، أجريت قراءات عند 450 نانومتر مع ضبط الطول الموجي للتصحيح عند 540 نانومتر ، باستخدام قارئ لوحة ELISA (Tecan) [33].

ليسيتس (20 ميكرومترg protein / lane) عن طريق الرحلان الكهربائي على المواد الهلامية SDS PAGE ونقلها إلى أغشية ثنائي فلوريد البوليفينيلدين ، باستخدام نظام Bio-Rad Miniprotean (Bio-Rad). تم حظر البقع ثم احتضانها بأجسام مضادة ضد ديسموتاز الفائق 1 (SOD1) ، انزيمات الأكسدة الحلقية 2 (COX2) ، سينثاس أكسيد النيتريك المحرض 2 (NOS2) ، ثم تم غسلها واحتضانها مع الأجسام المضادة الثانوية المرتبطة بالبيروكسيداز. تم الحصول على جميع الأجسام المضادة من التكنولوجيا الحيوية سانتا كروز. تم اكتشاف البروتينات باستخدام ركيزة Supersignal West Femto Chemiluminescent (Thermo Fisher Scientific ، Rockford IL ، الولايات المتحدة الأمريكية) ونظام تصوير Gel Doc المجهز بكاميرا XRS وبرنامج تحليل Quantity One (Bio-Rad). تم استخدام Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH ، Trevigen Biotechnology ، Gaithersburg ، MD (Maryland) ، الولايات المتحدة الأمريكية) كعنصر تحكم في تحميل البروتين.

50 ميكرومترتم استخدام g / mL (Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية) علامة لخيوط عضلية أكتين (خضراء) ، وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم زرع الخلايا في شرائح الغرفة بكثافة

/ الغرفة ، يُسمح لها بالاستقرار لمدة 24 ساعة ، ثم تعريضها لارتفاع نسبة الجلوكوز و SB كما هو موضح أعلاه. تم تلطيخ الخلايا المعالجة بعد ذلك باستخدام phalloidin-FITC. تم توثيق صور الخلايا بتكبير 20x ، باستخدام مجهر مقلوب أوليمبوس BX40 مزود بمصباح فلورسنت أوليمبوس CKX-RFA وكاميرا E330 (أوليمبوس ، هامبورغ ، ألمانيا).

2.5 تحليل احصائي

تم تقييم الدلالة الإحصائية للاختلافات بين المجموعة الضابطة والمجموعات المعالجة باختبار Kruskal-Wallis اللامعلمي لمجموعات متعددة ، متبوعًا بتحليل لاحق باستخدام اختبار Conover. تم حساب معاملات الارتباط بين المعلمات باستخدام معامل ارتباط سبيرمان للرتب (rho). تم إجراء الاختبارات الإحصائية باستخدام MedCalc الإصدار 18.11.3 و GraphPad Prism Software الإصدار 8.0.2. اعتبرت النتائج ذات دلالة إحصائية في

3. النتائج

3.1. التوصيف الكيميائي لل SB

تم تأكيد بنية SB من خلال التحليل الأولي وعلى أساس طيف الكتلة (MS) وطيف الأشعة تحت الحمراء (IR) والرنين المغناطيسي النووي (1 H NMR و 13 C NMR) أطياف [21].

4- (3-بروموبنزيليدينيامينو) -5- (4-ميثيل-2-فينيلثيازول-5-يل) -4H-1،2،4-تريازول-3-ثيول. العائد 80.3٪ (0.366 جم) مليون برميل. 268-270 درجة مئوية مسحوق أصفر فاتح الشرج. Calcd لـ C19ح14BrN5س2 (456.38): C، 49.89 H، 3.06 N، 15.33 S، 14.02 وجدت: C، 50.1 H، 3.07 N، 15.33 S، 14.07 IR (ATR، cm −1): 3104 (ν نيو هامبشايرتريازول), 1618 (ν -N = CH-) ، 1274 (ν ج = ق) 1055 (ν C-Br) 1 H NMR (500 ميجا هرتز ، DMSO-د6, δ/ جزء في المليون): 14.18 (ثانية ، 1 ساعة ، NH) ، 9.52 (ثانية ، 1 ساعة ، -N = CH-) ، 7.97-8.06 (يوم ، 2 ساعة ، أر إتش) ، 7.92 (ثانية ، 1 ساعة ، أر إتش) ، 7.77 (د ، 1H، ArH)، 7.59 (d، 1H، ArH)، 7.47-7.54 (m، 4H، ArH)، 2.41 (s، 3H، CH3) 13 C NMR (125 ميجا هرتز ، DMSO-د6, δ/ جزء في المليون): 170.12 (C = S) ، 159.15 (C) ، 157.66 (CH = N) ، 153.81 (C) ، 151.07 (C) ، 143.96 (C) ، 135.16 (C) ، 134.51 (C) ، 131.21 ( CH) ، 130.93 (2CH) ، 130.29 (CH) ، 129.29 (2CH) ، 128.94 (CH) ، 128.68 (C) ، 127.36 (CH) ، 127.14 (CH) ، 15.92 (CH)3) MS (EI ، 70 فولت) م/ض (٪): 457 (ذكور + 1).

3.2 نشاط مضادات الميكروبات

النتائج التي تم الحصول عليها عن طريق قياس أقطار مناطق تثبيط النمو للكائنات الحية الدقيقة المختبرة ، مقارنة بسيبروفلوكساسين وفلوكونازول ، المستخدمة كأدوية مرجعية قياسية ، معروضة في الجدول 1.

يتم عرض قيم MIC و MBC و MFC للمركب الجديد في الجدولين 2 و 3. وأظهرت النتائج أن قيم MIC تراوحت بين 1.95 (الليسترية المستوحدة) إلى 62.5 ميكرومترجم / مل ، كانت قيم MBC بين 3.9 و 125 ميكرومترتراوحت درجات g / mL و MFC بين 62.5 و 125 ميكرومترز / مل.

3.3 القدرة المضادة للأكسدة في المختبر

تم تحديد قدرة مضادات الأكسدة في SB بواسطة طريقة التبييض DPPH ، وتم استخدام BHT و trolox كعناصر تحكم إيجابية. النتائج معروضة في الجدول 4. أظهر المركب الجديد قيمة IC منخفضة للغاية50 القيمة (16.10 ميكرومترجم / مل) ، مماثلة لتلك الخاصة بـ BHT (16.39.39 ميكرومترز / مل).

3.4. حيوية الخلية

لم يؤد SB إلى تغييرات كبيرة في صلاحية HUVEC لجرعات أقل من 0.1 ميكرومترجم / مل (الشكل 1). أدت التركيزات الأعلى إلى انخفاض الجدوى المعتمدة على الجرعة ، مقارنةً بالتحكم.

3.5 تقييم قدرة SB على تعديل الاستجابة الالتهابية والإجهاد التأكسدي على HUVECs

مستوى بيروكسيد الدهون (MDA) ، القدرة على تعديل الاستجابة الالتهابية (TNF-α، COX2) ، ونشاط الإنزيمات المشاركة في توازن prooxidant / مضادات الأكسدة (SOD1 ، NOS2). تم اختبار قدرة SB على تعديل الإجهاد التأكسدي في المختبر على HUVECs ، باستخدام وسط غني بالجلوكوز [36-38]. تركيز SB من 0.001 ميكرومترتم استخدام جم / مل لجميع التجارب.

تم تقييم تأثير المركب المركب حديثًا على بيروكسيد الدهون (مستوى MDA). خفضت إدارة SB مستوى MDA مقارنة مع كل من التحكم والوسط المخصب بالجلوكوز ، وبالتالي تقليل بيروكسيد الدهون في الخلايا البطانية (الشكل 2).

TNF-α تم تحديد المستوى الكمي من خلال ELISA لنفس تركيز SB (الشكل 3). أدى الوسط المخصب بالجلوكوز إلى زيادة طفيفة في عامل نخر الورم-α مستوى. قامت SB أيضًا بزيادة TNF-α سواء بمفرده أو بالاشتراك مع الجلوكوز.

نفس تركيز SB (0.001 ميكرومترg / mL) لمزيد من اختبار تأثيره على مستوى البروتين للأنزيمات المشاركة في توازن الأكسدة / مضادات الأكسدة وفي الاستجابة الالتهابية (SOD1 و NOS2 و COX2).

تم تحديد كمية علامة التهابية (COX2) وإنزيم مضاد للأكسدة (SOD1 التأسيسي و NOS2 المحرض) بواسطة Western Blot (الشكل 4).

انخفض COX2 ، وهو علامة التهابية ، بشكل ملحوظ بعد علاجات الجلوكوز و SB ، مقارنةً بالتحكم. أدى التعرض المشترك (SB + G) إلى انخفاض شديد في مستوى البروتين في COX2 (الشكل 4 (ب)). تتوافق هذه النتيجة مع مستويات MDA وقد تكون بسبب التأثير المضاد للأكسدة لـ SB في هذا الإعداد التجريبي. ومن المثير للاهتمام أنه لا يتوافق مع TNF-α، وهي حقيقة يمكن تفسيرها بآلية مختلفة عن الإجهاد التأكسدي الذي يؤدي إلى زيادة عامل نخر الورم-α. أدى التعرض للوسط المخصب بالجلوكوز إلى انخفاض كبير في SOD1. خفض SB نشاط SOD1 بشكل طفيف مقارنة بالمجموعة الضابطة ، ولكن تم الحفاظ على نشاط SOD1 عند مستوى أعلى بكثير ، مقارنة مع الجلوكوز (). أدى العلاج المركب (SB + G) إلى انخفاض كبير في SOD1 مقارنة بكل من الجلوكوز والتحكم (الشكل 4 (ج)). زاد التعرض للجلوكوز بشكل ملحوظ NOS2. خفض SB بشكل كبير مستوى NOS2 مقارنة بكل من مجموعتي التحكم والجلوكوز (الشكل 4 (د)).

كشف تحليل الارتباط ، باستخدام معامل سبيرمان لارتباط الرتبة (الجدول 5) ، عن ارتباطات إيجابية ذات دلالة إحصائية بين مستويات MDA والإنزيم (COX2 و SOD1 و NOS2). من ناحية أخرى ، فإن TNF-α يرتبط المستوى سلبًا بكل من MDA وجميع الإنزيمات المقاسة.

لا يبدو أن مورفولوجيا الخلية تتأثر بالتعرض لقاعدة شيف مقارنةً بالتحكم. عند تعرضها لتركيز مرتفع من الجلوكوز ، تميل الخلايا إلى التكتل وتشكيل أجسام كروية متعددة الطبقات ، مع تغيير في التخلص من خيوط الأكتين. كان جانب الخلايا التي تتلقى العلاج المركب مشابهًا لتلك الموجودة في الضوابط (الشكل 5).

4. مناقشة

تم إنشاء بنية قاعدة شيف من خلال التحليل الأولي وعلى أساس طيف الكتلة (MS) وطيف الأشعة تحت الحمراء (IR) والرنين المغناطيسي النووي (1 H-NMR و 13 C-NMR). كانت نتائج التحليل الكمي للعنصري C ، H ، N ، S متفقة مع القيم المحسوبة ، ضمن ± 0.4٪ من القيم النظرية. أكدت البيانات الطيفية تشكيل SB. كشف الطيف الكتلي المسجل عن ذروة الأيونات الجزيئية الصحيحة (

) ، على النحو الذي تقترحه الصيغة الجزيئية. غياب NH2 قدمت اهتزازات التمدد غير المتماثلة والمتناظرة عند 3281 سم -1 و 3186 سم -1 ، ووجود نطاقات امتصاص الامتصاص N = CH عند 1618 سم -1 في طيف الأشعة تحت الحمراء للمركب النهائي أدلة قوية لتشكيل SB. تم تسجيل طيف 1 H-NMR لمركب البداية كخاصية إشارة للبروتونات الأمينية ، كقطعة واحدة ، عند 5.73 جزء في المليون. أكد عدم وجود هذه الإشارة من طيف 1 H-NMR للمركب المركب حديثًا ووجود خاصية مفردة مميزة للبروتون N = CH عند 9.52 جزء في المليون من التكثيف بين 4-amino-5- (4-methyl- 2-فينيلثيازول-5-يل] -4ح-1،2،4-تريازول-3-ثيول و 3-برومو-فينيل-كاربالديهايد. كان الطيف 13 C-NMR للمركب المركب حديثًا متسقًا مع الهيكل المقترح.

كان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم النشاط المضاد للبكتيريا والفطريات لـ SB الجديد بالإضافة إلى قدرته على تعديل الإجهاد التأكسدي.

مارس ثيازوليل إس بي الجديد نشاطًا متوسطًا إلى جيد كمضاد للبكتيريا ضد السلالات المختبرة (الجداول 1-3). كان تثبيط نمو البكتيريا أكثر وضوحا في البكتيريا سالبة الجرام ، وخاصة في الزائفة الزنجارية السلالة ، حيث أظهر SB نشاطًا أفضل مقارنةً بسيبروفلوكساسين ، المستخدم كعقار مرجعي. فيما يتعلق بالنشاط المضاد للفطريات ، أظهر المركب مضادًا أفضلالكانديدا تأثير من فلوكونازول ، يستخدم كدواء مرجعي. أظهرت الدراسات السابقة أن SBs لديها القدرة على تعديل الإجهاد التأكسدي [17 ، 39]. يمكن استغلال هذه القدرة من أجل استخدامها كأدوية مضادة للبكتيريا و / أو كمعدلات محتملة للتأكسد في الطب. تم اختبار SB على الخلايا البطانية المعرضة لبيئة غنية بالجلوكوز.

يؤدي تناول الكربوهيدرات المرتفع وضعف تحمل الجلوكوز وداء السكري إلى ارتفاع السكر في الدم وحالة التهابية مزمنة. غالبًا ما تشارك الآفات البطانية في أمراض هذه الحالات [40]. أثناء نوبات الالتهاب ، مثل الاستجابة للإصابة ، يتم إطلاق أكسيد النيتريك (NO) من أجل تعديل قوة الأوعية الدموية. نظرًا لأن glycocalyx يلعب دورًا مهمًا في تحويل ضغط السائل إلى الهيكل الخلوي للخلايا البطانية ، يتم تحفيز إنتاج مادة موسع الأوعية [40-42]. يزيد تركيز الجلوكوز المرتفع من الإجهاد التأكسدي ويؤثر على بنية الهيكل الخلوي. يؤدي التعرض لفرط الأسمولية الذي يحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز ، باستخدام آلية تعتمد على AQP1 ، إلى إعادة تشكيل F-actin والهيكل الخلوي [43]. نتائجنا تتفق مع هذه النتائج (الشكل 5). أدى ارتفاع مستوى الجلوكوز إلى خلل في الميتوكوندريا وزيادة إنتاج ROS [44 ، 45].

تؤدي البيئة المخصبة بالجلوكوز أيضًا إلى إطلاق السيتوكينات المسببة للالتهابات ، مثل عامل نخر الورم ألفا (TNF-α) ، بواسطة الخلايا المشاركة في التفاعلات المناعية [46 ، 47] ، جنبًا إلى جنب مع الجزيئات المسببة للالتهابات ، مثل CRP ، والإنترلوكين 6 ، وجزيء الالتصاق بين الخلايا 1 ، و VCAM-1. في مرضى السكري ، عامل نخر الورم-α كان مرتبطًا بملف تصلب الشرايين ومضاعفات الأوعية الدموية [48]. تم الحصول على تأثير مماثل في دراستنا ، حيث تم الحصول على مستويات أعلى من عامل نخر الورم-α لوحظت بعد التعرض لارتفاع السكر في الدم. شوهد هذا التأثير أيضًا بعد علاج SB وتم زيادته من خلال SB المركب وتركيز عالي من الجلوكوز. ومع ذلك ، TNF-α كان الإنتاج مرتبطًا سلبًا مع MDA والإنزيمات المضادة للأكسدة (الجدول 5). هذا يشير إلى أن زيادة TNF-α لم يتم إنتاجه من خلال الإجهاد التأكسدي المعزز ، ولكن من خلال آلية مختلفة. توضيحها يتطلب مزيدا من الدراسات. منذ TNF-α يعمل كمحفز لالتصاق الكريات البيض بالبطانة ، وقد يكون SB مفيدًا كمضاد للميكروبات ، والاستجابة المناعية المحلية ، ومعدِّل الحالة المؤكسدة في علاج الأمراض المعدية.

أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها من خلال دراسة DPPH أن SB أظهر نشاطًا مضادًا للأكسدة. انخفاض IC50 القيمة ، على غرار التحكم الإيجابي (BHT) ، تعكس نشاطًا قويًا مضادًا للأكسدة في المختبر. أظهر المركب الجديد نشاط تنظيف جذري وفقًا لطريقة DPPH ، ومن المحتمل أن يكون وجود مجموعة -SH مسؤولاً عن نشاط الكسح الجذري [49-51]. تم اختبار تأثير SB على الإجهاد التأكسدي أيضًا في المختبر على مزارع الخلايا (HUVECs) ، من خلال تقييم مستوى MDA ، وعلامة بيروكسيد الدهون والتعبير عن اثنين من الإنزيمات المشاركة في التوازن التأكسدي (SOD1 و NOS2). وأظهرت النتائج أنه عند التركيز المختبَر (0.001 ميكرومترg / mL) ، خفض SB بيروكسيد الدهون (MDA) ومستوى البروتين لبعض الإنزيمات المشاركة في تعديل الإجهاد التأكسدي والاستجابة الالتهابية (COX2 و NOS2). تتوافق هذه التغييرات مع نتيجة DPPH وتشير إلى وجود تأثير مضاد للالتهابات لـ SB المختبَر ، غالبًا عن طريق التدخل في الوسطاء prooxidant.

يمكن تفسير قدرة SB ، بتركيزات منخفضة ، على تقليل بيروكسيد الدهون ، من خلال قدرته على تكوين معقدات مع أيونات المعادن ثنائية التكافؤ وثلاثية التكافؤ الموجودة في المركز النشط للأنزيمات المشاركة في بداية الإجهاد التأكسدي أو في تنظيف جزيئات prooxidant [52-57]. يتوافق تأثير مضادات الأكسدة على الخلايا البشرية (الشكلان 2 و 4) أيضًا مع عدم وجود تغييرات مورفولوجية للخلايا التي لوحظت في هذه الدراسة (الشكل 5).

النظر في النشاط المضاد للبكتيريا ، وخاصة ضد الزائفة الزنجارية، انخفاض مستوى البروتين NOS2 في HUVECs بعد التعرض SB ، قد يكون من الممكن أيضًا تقليل تخليق NO بواسطة البكتيريا. أحد الأدوار العديدة المقترحة لأكسيد النيتروجين في البكتيريا هو المساعدة في حماية البكتيريا من الإجهاد التأكسدي الناتج عن المضادات الحيوية للخلايا المضيفة ، لذلك تم تحديد تثبيط سينثيز أكسيد النيتريك البكتيري باعتباره إستراتيجية واعدة مضادة للجراثيم ، خاصة للبكتيريا المقاومة [58].

تم الإبلاغ عن الأدوية المتبرعة بـ NO لمثبط أكسيد النيتريك (NOS) لتثبيط IL-1β الإنتاج ، تعديل PGE2 إنتاج ، والوقاية من موت الخلايا المبرمج في الخلايا البطانية البشرية وحيدات الإنسان [59]. في مرض السكري من النوع 2 ، يحفز ارتفاع السكر في الدم هجرة الخلايا البطانية في شبكية العين ، مما يؤدي إلى تكوين الأوعية الجديدة في شبكية العين وضعف البصر عن طريق تحفيز مستقبل CXC-4 وتنشيط مسار إشارات PI3K / Akt / eNOS. لذلك ، قد يكون تعديل SB لـ NOS2 مفيدًا للخلل البطاني في ارتفاع السكر في الدم [60 ، 61].

أظهرت الدراسات الحديثة أن النشاط المضاد للبكتيريا والفطريات بشكل عام ونشاط المضادات الحيوية لبعض الفئات التي تم تحديدها حديثًا يبدو أنهما يرتبطان بقدرتها على تحفيز تخليق ROS [5]. أظهر SB مضادًا لـ-الكانديدا مع فعالية مضاعفة مضاعفة مقارنة مع الفلوكونازول المضاد للفطريات (الجدولان 2 و 3). أظهرت النتائج أيضًا أن SB خفض مستوى SOD1 وزيادة نشاط السيتوكين المنبه للالتهابات (TNF-α). يمكن أيضًا تفسير التأثير المضاد للفطريات من خلال قدرة SB المختبرة على تكوين معقدات بين مجموعة الأزوميثين والمعدن من المركز النشط للأنزيمات وأيضًا من خلال قدرتها على تحفيز إنتاج ROS ، على غرار بعض مضادات الآزولات المضادة للفطريات (على سبيل المثال ، ميكونازول ) [5].

هناك حاجة لدراسات إضافية من أجل توضيح تأثير مركبات مثل SB ودورها كمضاد أكسدة مساعد ومضاد للميكروبات ومعدلات الاستجابة المناعية المحلية (TNF-α) في علاج الأمراض المعدية.

5. الاستنتاجات

أظهرت قاعدة شيف الجديدة تأثيرات مضادة للجراثيم على البكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام ، بالإضافة إلى نشاط مضاد للفطريات ضد المبيضات البيض. تظهر نتائج الدراسة الحالية أن SB الجديد يلعب دورًا في توازن prooxidant / مضادات الأكسدة. في الجرعة المختبرة ، لا يغير SB مورفولوجيا الخلايا البطانية ، وله تأثير مضاد للأكسدة ، كما يتضح من اختبار DPPH ، ويقلل بيروكسيد الدهون (MDA) ، ويقلل من مستوى NOS2 المحرض. لذلك ، يمكن اعتباره مرشحًا محتملاً بخصائص واعدة مضادة للأكسدة يمكن استخدامه كعلاج مساعد في الأمراض التي يسببها الإنتاج المفرط للجذور الحرة. قد يشير الانخفاض في مستويات COX2 و NOS2 أيضًا إلى عمل مضاد للالتهابات. يمكن أن تشمل الآلية المحتملة للنشاط المضاد للبكتيريا على العصيات سالبة الجرام انخفاض مستوى NOS البكتيري وتكوين مجمعات مع المعادن الموجودة في المركز النشط لبعض الإنزيمات البكتيرية. أيضًا ، قد يعمل SB كعامل مضاد للفطريات ، من خلال إنتاج ROS في خلايا الأغشية الحيوية الفطرية. توضيحها يتطلب مزيدا من الدراسات.

توافر البيانات

تم تضمين البيانات المستخدمة لدعم نتائج هذه الدراسة في المقالة.

تضارب المصالح

يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بنشر هذه الورقة.

مساهمات المؤلفين

قام كل من Cristian Cezar Login و oimiţa Suciu و Ioana Bâldea و Brînduşa Tiperciuc بتصميم التصميم التجريبي والتخطيط له. أجرى Brînduşa Tiperciuc التركيب الكيميائي وتوصيف المركبات. أجرى دان كريستيان فودنار فحصًا مضادًا للبكتيريا والفطريات. قامت دانييلا بينديك بأداء في المختبر تقييم النشاط المضاد للأكسدة. قامت Ioana Bâldea بأداء في المختبر الاختبار على مزارع الخلايا. قامت Nicoleta Decea بإجراء التقييم الكيميائي الحيوي لبعض علامات الإجهاد التأكسدي. أجرى كريستيان سيزار لوجن وإيوانا بولديا التحليل الإحصائي. قام كل من Cristian Cezar Login و Ioana Bâldea و Brînduşa Tiperciuc و Daniela Benedec و oimiţa Suciu بتحليل البيانات وكتبوا الورقة. ساهم كل من كريستيان سيزار لوجين وبرندوشا تيبيرسيوك وإيوانا بالديا ودانييلا بينيديك في هذا العمل بشكل متساوٍ.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا البحث من قبل "Iuliu Hațieganu" جامعة الطب والصيدلة كلوج نابوكا منحة البحث الداخلية رقم 4944/23 / 08.03.2016 (Cristian Cezar Login).

مراجع

  1. واو أكتان ، "إنتاج أكسيد النيتريك بوساطة iNOS وتنظيمه ،" علوم الحياة، المجلد. 75 ، لا. 6 ، الصفحات من 639 إلى 653 ، 2004. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  2. دبليو دروج ، "الجذور الحرة في التحكم الفسيولوجي لوظيفة الخلية ،" المراجعات الفسيولوجية، المجلد. 82 ، لا. 1، pp. 47–95، 2002. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  3. T. Fukai و M. Ushio-Fukai ، "ديسموتازات الأكسدة الفائقة: دور في إشارات الأكسدة والاختزال ، ووظيفة الأوعية الدموية ، والأمراض ،" مضادات الأكسدة وإشارات الأكسدة والاختزال، المجلد. 15 ، لا. 6، pp. 1583–1606، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  4. B. D. McCollister ، M. Hoffman ، M. Husain ، و A. Vázquez-Torres ، "يحمي أكسيد النيتريك البكتيريا من الأمينوغليكوزيدات عن طريق منع المراحل المعتمدة على الطاقة في امتصاص الدواء ،" عوامل مضادات الميكروبات والعلاج الكيميائي، المجلد. 55 ، لا. 5، pp. 2189–2196، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  5. N. Delattin ، B. P. Cammue ، و K. Thevissen ، "العوامل المضادة للفطريات التفاعلية التي تحفز أنواع الأكسجين ونشاطها ضد الأغشية الحيوية الفطرية ،" الكيمياء الطبية المستقبلية، المجلد. 6 ، لا. 1، pp.77–90، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  6. L. Balanean ، C. Braicu ، I. Berindan-Neagoe et al. ، "تخليق رواية 2-metylamino-4-البديلة-1،3-ثيازول مع نشاط مضاد للتكاثر ،" Revista de Chimie-Bucharest، المجلد. 65 ، ص 1413-1417 ، 2014. عرض على: الباحث العلمي من Google
  7. R. Tamaian ، A. Moţ ، R. Silaghi-Dumitrescu et al. ، "دراسة العلاقات بين التركيب ، وميل للدهون ، والنشاط البيولوجي لبعض ثيازول-كربونيل-ثيوسيميكاربازيدات وثيازوليل-أزول ،" جزيئات، المجلد. 20 ، لا. 12 ، ص 22188-22201 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  8. Y.nver ، K. Sancak ، F. Çelik et al. ، "New thiophene-1،2،4-triazole-5 (3) -ones: عالية النشاط حيويًا من مادة thiosemicarbazides ، هياكل قواعد Schiff و triazole-thiols ،" المجلة الأوروبية للكيمياء الطبية، المجلد. 84، pp.639–650، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  9. GY Nagesh و K. Mahendra Raj و BHM Mruthyunjayaswamy ، "التوليف والتوصيف والدراسة الحرارية والتقييم البيولوجي لمجمعات Cu (II) و Co (II) و Ni (II) و Zn (II) من ليجند قاعدة شيف التي تحتوي على جزء ثيازول ، " مجلة التركيب الجزيئي، المجلد. 1079 ، ص 423-432 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  10. زايد ومحمد أ. زايد ، "توليف قواعد شيف الجديدة للأنشطة البيولوجية المحتملة للغاية والتحقيق في بنيتها" Spectrochimica Acta. الجزء أ ، التحليل الطيفي الجزيئي والجزيئي الحيوي، المجلد. 143 ، ص 81-90 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  11. K. P. Rakesh ، H. M. Manukumar ، and D.C Gowda ، "قواعد شيف لمشتقات الكينازولينون: التوليف ودراسات معدل الامتصاص النوعي لسلسلة جديدة من مضادات الالتهاب ومضادات الأكسدة المحتملة ،" رسائل الكيمياء الحيوية والعضوية الطبية، المجلد. 25 ، لا. 5، pp.1072–1077، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  12. بارمار ، S. Teraiya ، R. Patel ، H. Barad ، H. Jajda ، and V. Thakkar ، "أنشطة التوليف ومضادات الميكروبات ومضادات الأكسدة لبعض قواعد شيف المكونة من 5 بيرازولون ،" مجلة الجمعية الكيميائية السعودية، المجلد. 19 ، لا. 1، pp.36–41، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  13. M. Yıldız، Ö. Karpuz ، C. T. مجلة التركيب الجزيئي، المجلد. 1094 ، ص.148-160 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  14. N. El-Wakeel، M. El-keiy، M. Gaber، “Synthesis، Spectral، Antitumor، Antioxidant and Antimicrobial studies on Cu (II)، Ni (II) and Co (II) Collections of 4 - [(1H -benzoimidazol-2-ylimino) -methyl] -benzene-1،3-diol ، " Spectrochimica Acta. الجزء أ ، التحليل الطيفي الجزيئي والجزيئي الحيوي، المجلد. 147 ، ص 117-123 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  15. SA Al-Harbi، MS Bashandy، HM Al-Saidi، AAA Emara، TAA Mousa، “التركيب ، الخصائص الطيفية ، الالتحام الجزيئي ، مكافحة سرطان القولون والدراسات المضادة للميكروبات لبعض المركبات المعدنية الجديدة لـ 2-amino-4- مشتق فينيلثيازول ، " Spectrochimica Acta. الجزء أ ، التحليل الطيفي الجزيئي والجزيئي الحيوي، المجلد. 145 ، ص 425-439 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  16. R. Selwin Joseyphus و C. Shiju و J. Joseph و C. Spectrochimica Acta. الجزء أ ، التحليل الطيفي الجزيئي والجزيئي الحيوي، المجلد. 133 ، ص 149-155 ، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  17. N. Turan ، M.F Topçu ، Z. Ergin et al. ، "التأثيرات المؤكسدة والمضادة للتكاثر لقاعدة شيف القائمة على 1،3،4-ثياديازول ومجمعاتها المعدنية ،" الأدوية والسموم الكيميائية، المجلد. 34 ، لا. 4، pp.369–378، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  18. S. Gupta و A. Roy و B. S. Dwarakanath ، "التعاون الأيضي والمنافسة في البيئة الدقيقة للورم: الآثار المترتبة على العلاج" الحدود في علم الأورام، المجلد. 7 ، ص. 68 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  19. K. Zhao ، D. Li ، W. Xu et al. ، "مستهدف هيدروكسي إيثيل نشا برودروغ لتثبيط نمو ورم خبيث لسرطان البروستاتا ،" المواد الحيوية، المجلد. 116 ، ص 82-94 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  20. C. Nastasă ، B. Tiperciuc ، M. Duma ، D. Benedec ، و O. Oniga ، "الهيدرازونات الجديدة التي تحمل سقالة الثيازول: التوليف والتوصيف والتحقيق في مضادات الميكروبات ومضادات الأكسدة ،" جزيئات، المجلد. 20 ، لا. 9 ، ص 17325-17338 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  21. A. Stana ، A. Enache ، D. Vodnar et al. ، "قواعد Thiazolyl-triazole Schiff الجديدة: تركيب وتقييم إمكانات مكافحة المبيضات ،" جزيئات، المجلد. 21 ، لا. 11 ، ص. 1595، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  22. C. Nastasă ، D. Vodnar ، I. Ionuţ et al. ، "التقييم المضاد للبكتيريا والفحص الافتراضي لقواعد Thiazolyl-triazole Schiff الجديدة كمثبطات محتملة لـ DNA-gyrase ،" المجلة الدولية للعلوم الجزيئية، المجلد. 19 ، لا. 1 ، ص. 222، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  23. A. Stana ، D. Vodnar ، R. Tamaian et al. ، "تقييم التصميم والتوليف والنشاط المضاد للفطريات لمركبات ثيازولين 4 الجديدة باعتبارها لانوستيرول محتمل 14αمثبطات ديميثيلاز ، " المجلة الدولية للعلوم الجزيئية، المجلد. 18 ، لا. 1 ، ص. 177 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  24. حسن ، أ.م.عمر ، إ. عباس ، و. التقارير العلمية، المجلد. 8 ، لا. 1 ، ص. 11416، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  25. M. Krátký ، M. Dzurková ، J. Janoušek et al. ، "قواعد شيف القائمة على سلفاديازين ساليسيل ألدهيد: التوليف والنشاط المضاد للميكروبات والسمية الخلوية ،" جزيئات، المجلد. 22 ، لا. 9 ، ص. 1573 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  26. CT Zeyrek ، B. Boyacioğlu ، M. Yıldız et al. ، "توليف وتوصيف وتقييم (E) -methyl 2 - ((2-oxonaphthalen-1 (2H) -ylidene) methylamino) كعامل بيولوجي و جهاز استشعار أنيون " الكيمياء الحيوية والطبية، المجلد. 24 ، لا. 21 ، ص 5592-5601 ، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  27. Y. nver ، S. ، " مجلة تثبيط الانزيم والكيمياء الطبية، المجلد. 31 ، لا. sup3 ، ص 89-95 ، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  28. W. Yehye، N. Abdul Rahman، O. Saad et al. ، "التصميم العقلاني والتوليف لمضادات الأكسدة الجديدة عالية الكفاءة متعددة الإمكانات من Schiff base-1،2،4-triazole التي تحمل شقوق هيدروكسي تولين بوتيليتيد ،" جزيئات، المجلد. 21 ، لا. 7 ، ص. 847، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  29. E. S. Lima ، A. C. S. Pinto ، K. L. Nogueira et al. ، "الاستقرار والنشاط المضاد للأكسدة للمشتقات شبه الاصطناعية من 4-nerolidylcatechol ،" جزيئات، المجلد. 18 ، لا. 1، pp. 178–189، 2013. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  30. D. Benedec ، L. Vlase ، I. Oniga et al. ، "التركيب البوليفينولي ، الأنشطة المضادة للأكسدة والبكتيريا لنوعين فرعيين رومانيين من Achillea distans Waldst. وآخرون كيت. السابق ويلد ، " جزيئات، المجلد. 18 ، لا. 8، pp.8725–8739، 2013. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  31. I. Baldea ، G.E. Costin ، Y. Shellman et al. ، "التأثيرات ثنائية الطور المؤيدة للميلانين والمؤيدة للاستماتة لحمض الريتينويك بالكامل (ATRA) على الخلايا الصباغية البشرية: دراسة الوقت ،" مجلة علوم الأمراض الجلدية، المجلد. 72 ، لا. 2، pp.168–176، 2013. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  32. I. Baldea ، D. E. Olteanu ، P. Bolfa et al. ، "كفاءة العلاج الضوئي على الورم الميلانيني WM35 مع البورفيرينات الاصطناعية: دور التركيب الكيميائي ، والاستهداف داخل الخلايا والدفاع المضاد للأكسدة ،" مجلة الكيمياء الضوئية والبيولوجيا الضوئية. ب، المجلد. 151 ، ص 142-152 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  33. تيودور ، آي نينو ، جي إيه فيليب وآخرون ، "النظام المشترك للعلاج الضوئي الديناميكي بوساطة كلوريد جاليوم فثالوسيانين والميتفورمين يعزز فعالية مكافحة سرطان الجلد ،" بلوس واحد، المجلد. 12 ، لا. 3 ، ص. e0173241، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  34. إم إل هو ، "[41] قياس مجموعات بروتين ثيول والجلوتاثيون في البلازما ،" طرق في علم الانزيمات، المجلد. 233، pp.380–385، 1994. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  35. A. Filip ، D. Daicoviciu ، S. Clichici ، T. Mocan ، A. Muresan ، و I. D. Postescu ، "التأثيرات الضوئية لمنتجين طبيعيين على الإجهاد التأكسدي المستحث بالأشعة فوق البنفسجية B وموت الخلايا المبرمج في جلد الفأر SKH-1 ،" مجلة الغذاء الطبي، المجلد. 14 ، لا. 7-8 ، ص 761-766 ، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  36. J. Shen ، M. Liu ، J. Xu ، B. Sun ، H. Xu ، and W. Zhang ، "يخفف الإفراط في التعبير ARL15 من الضعف الناجم عن الجلوكوز في إشارات الأنسولين والإجهاد التأكسدي في الخلايا البطانية للوريد السري البشري ،" علوم الحياة، المجلد. 220، pp.127–135، 2019. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  37. R. Chibber ، P. A. Molinatti ، و E. M. Kohner ، "بروتين الجلوكوز داخل الخلايا في الحبيبات الشعرية المزروعة في شبكية العين والخلايا البطانية المعرضة لتركيز مرتفع من الجلوكوز ،" البيولوجيا الخلوية والجزيئية (Noisy-le-Grand ، فرنسا)، المجلد. 45 ، لا. 1، pp.47–57، 1999. View at: Google Scholar
  38. R.J. Esper ، و J.O. Vilariño ، و R. A. Machado ، و A. Paragano ، "خلل وظيفي في عملية التمثيل الغذائي للجلوكوز الطبيعي وغير الطبيعي ،" التقدم في أمراض القلب، المجلد. 45، pp. 17–43، 2008. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  39. جوزيف وجي بي جاناكي ، "مجمعات النحاس التي تحتوي على مشتقات 2-أمينوبنزوثيازول كمضاد أكسدة محتمل: التوليف والتوصيف" مجلة الكيمياء الضوئية والبيولوجيا الضوئية. ب، المجلد. 162 ، ص 86-92 ، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  40. N.W.Hansen ، و A.J.Hansen ، و A. Sams ، "الحدود البطانية للصحة: ​​دليل ميكانيكي على السبب وراء ارتفاع السكر في الدم لتسريع الأمراض الالتهابية ،" الحياة IUBMB، المجلد. 69 ، لا. 3، pp.148–161، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  41. جيه.أيه.فلوريان ، وجي آر كوسكي ، وك. أينسلي ، وز. بانغ ، و. بحوث الدورة الدموية، المجلد. 93 ، لا. 10، pp. e136-e142، 2003.عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  42. S. Mochizuki ، H. Vink ، O. Hiramatsu et al. ، "دور حمض الهيالورونيك الجليكوزامينوجليكان في إطلاق أكسيد النيتريك المشتق من البطانة الناجم عن القص ،" المجلة الأمريكية لعلم وظائف الأعضاء. فسيولوجيا القلب والدورة الدموية، المجلد. 285 ، لا. 2، pp. H722 – H726، 2003. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  43. مادونا ، واي جيه جينج ، هـ. شيلات ، ب.فرديناندي ، و آر دي كاترينا ، "تأثير فرط تسمم الدم الناجم عن الجلوكوز المرتفع ، وإعادة تشكيل الهيكل الخلوي ، وترحيل الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان عبر أكوابورين -1 ،" Biochimica et Biophysica Acta، المجلد. 1842 ، لا. 11، pp. 2266–2275، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  44. W. Zhu و Y. Yuan و G. Liao et al. ، "تعمل الخلايا الجذعية الوسيطة على تحسين الإصابة البطانية التي يسببها ارتفاع السكر في الدم من خلال تعديل الوعاء الدموي" موت الخلايا والأمراض، المجلد. 9 ، لا. 8 ، ص. 837، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  45. A. Pallag ، G. A. Filip ، D. Olteanu et al. ، "يحفز مستخلص Equisetum arvense L. نشاطًا مضادًا للبكتيريا وينظم الإجهاد التأكسدي والالتهاب وموت الخلايا المبرمج في الخلايا الوعائية البطانية المعرضة للإجهاد المفرط ،" الطب التأكسدي وطول العمر الخلوي، المجلد. 2018 ، 14 صفحة ، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  46. R.D. Martinus و J. Goldsbury ، "Endothelial TNF-α الحث بواسطة Hsp60 المفرز من حيدات THP-1 المعرضة لظروف ارتفاع السكر في الدم ، " إجهاد الخلية والمرافقين، المجلد. 23 ، لا. 4 ، ص 519-525 ، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  47. I. Castellano ، P. di Tomo ، N. di Pietro et al. ، "النشاط المضاد للالتهابات للبويضة البحرية A في في المختبر نموذج للخلل البطاني الناجم عن ارتفاع السكر في الدم ، " الطب التأكسدي وطول العمر الخلوي، المجلد. 2018 ، 12 صفحة ، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  48. D. Tousoulis ، N. Papageorgiou ، E. Androulakis et al. ، "ضعف الأوعية الدموية المرتبط بداء السكري: المؤشرات الحيوية المتداولة والأساليب العلاجية الجديدة ،" مجلة الكلية الأمريكية لأمراض القلب، المجلد. 62 ، لا. 8، pp.667–676، 2013. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  49. M. Kumar ، T. Padmini ، and K. Ponnuvel ، "التركيب والتوصيف والأنشطة المضادة للأكسدة لقواعد شيف من الكوليسترول ،" مجلة الجمعية الكيميائية السعودية، المجلد. 21، pp. S322-S328، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  50. C. Aswathanarayanappa و E. Bheemappa و Y.D Bodke و P. S. أرش فارم (واينهايم)، المجلد. 346 ، لا. 12 ، ص 922-930 ، 2013. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  51. ريفاثي ، إم سانكارغانش ، جي راجيش ، وجيه دي راجا ، "مجمعات Cu (II) و Co (II) و Ni (II) و Zn (II) لمشتقات بيريميدين قاعدة شيف: ربط الحمض النووي ، ومضادات الأكسدة ، دراسات مضادة للجراثيم ومضادة للسرطان في المختبر ، " مجلة الإسفار، المجلد. 27 ، لا. 5، pp.1801–1814، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  52. M. Hajrezaie ، S. Golbabapour ، P. Hassandarvish et al. ، "دراسات السمية الحادة وحماية المعدة لمركب النحاس (II) الجديد المشتق من قاعدة شيف ضد الآفات المعدية الحادة التي يسببها الإيثانول في الجرذان ،" بلوس واحد، المجلد. 7 ، لا. 12 ، ص. e51537، 2012. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  53. في. أ. داير ، إ. ريفيير ، إس ماليت-لاديرا ، دي إم مورينو ، سي هوورو ، إس آر سينيوريلا ، "توليف وتوصيف ونشاط مجمعات إيميدازولات ثنائية النواة وقاعدة شيف كنماذج من Cu ، Zn-SOD. دراسة مقارنة ، " مجلة الكيمياء الحيوية غير العضوية، المجلد. 163 ، ص 162 - 175 ، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  54. Q. Wei و J. Dong و P. Zhao et al. ، "ارتباط الحمض النووي وتفاعل BSA ونشاط SOD لمجمعين جديدين من النيكل (II) مع روابط قاعدة الجلوتامين شيف ،" مجلة الكيمياء الضوئية والبيولوجيا الضوئية. ب، المجلد. 161، pp.355–367، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  55. C. Palopoli ، G. Gómez ، A. Foi et al. ، "Dimerization ، خصائص الأكسدة والاختزال والنشاط المضاد للأكسدة لمجمعين من المنغنيز (III) من ديفلورو- وديكلورو بديل ليجاند شيف- قاعدة ،" مجلة الكيمياء الحيوية غير العضوية، المجلد. 167 ، ص 49-59 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  56. P. Zhao ، S. Zhai ، J. Dong et al. ، "التخليق والهيكل وتفاعل الحمض النووي ونشاط SOD لثلاثة مجمعات نيكل (II) تحتوي على قاعدة L-phenylalanine Schiff و 1،10-phenanthroline ،" الكيمياء الحيوية العضوية والتطبيقات، المجلد. 2018 ، 16 صفحة ، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  57. S. Maghraoui ، S. Clichici ، A. Ayadi et al. ، "الإجهاد التأكسدي في الدم وخصية الجرذان بعد تناول الألمنيوم والإنديوم داخل الصفاق ،" اكتا فيزيولوجيكا هنغاريكا، المجلد. 101 ، لا. 1 ، ص 47-58 ، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  58. J.K Holden ، M.C Lewis ، M.A Cinelli et al. ، "استهداف سينثاز أكسيد النيتريك البكتيري بمثبطات أساسها aminoquinoline ،" الكيمياء الحيوية، المجلد. 55 ، لا. 39، pp. 5587–5594، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  59. ج.ن.شارما ، أ.العمران ، وس. س. بارفاثي ، "دور أكسيد النيتريك في الأمراض الالتهابية" ، Inflammopharmacology، المجلد. 15 ، لا. 6 ، ص 252-259 ، 2007. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  60. إم بوتا ، إي ديستروتي ، إيه مينكاريللي وآخرون ، "النشاط المضاد للالتهابات لفئة جديدة من مثبطات سينثاز أكسيد النيتريك التي تطلق أكسيد النيتريك ،" كيم ميدكيم، المجلد. 3 ، لا. 10، pp. 1580–1588، 2008. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  61. س. حامد ، برينر ، ز. عباسي ، أ. أهرون ، د. داود ، أ. روجين ، "ارتفاع السكر في الدم و LDL المؤكسد يؤثران تأثيرًا ضارًا على انتقال الخلايا البطانية السلفية في داء السكري من النوع 2 ،" بحوث التخثر، المجلد. 126 ، لا. 3، pp. 166–174، 2010. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل

حقوق النشر

حقوق النشر & # x00A9 2019 Cristian Cezar Login et al. هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب ترخيص Creative Commons Attribution License ، والذي يسمح بالاستخدام غير المقيد والتوزيع والاستنساخ في أي وسيط ، بشرط الاستشهاد بالعمل الأصلي بشكل صحيح.


66 , 249 (1970).

[28] Gray S ، Nurse G ، Visser L ، الكيمياء الحيوية والبيوفيزيائية تبحث في الاتصالات, 52,
687 (1973).
[29] سيامال ، موريا إم آر ، مراجعات كيمياء التنسيق, 95, 183-238 (1989).
[30] Hilder V.A ، Gatehouse A ، Sheerman E ، Barker R ، Boulter D ، طبيعة سجية, 330، 160 (1987). [31] Marcos V، Latzin P، Hector A، Sonanini F، Hoffmann، M، Lacher B. Koller، P. Bufler،
تي ، نيكولاي د ، بحوث الجهاز التنفسي, 11, 32 (2010).
[32] Andreyev Y، Kushnareva Y E، Starkov A، الكيمياء الحيوية، 70(2), 246-264 (2005).
[33] أمتول زد ، عطا الرحمن ر ، صديقي أ ، شودري م ، الكيمياء الطبية الحالية, 9,
1323 (2002).
[34] تشين د ، هان إف ، ياو واي ، زانغ واي ، شين كيو ، دالتون معاملة ، 285535-41 (2009).
[35] Qiu J ، Lu M ، Yao Y ، Zhang Y ، Wang Y ، Shen Q ، Dalton Transaction ، 42 (28): 10179-
89(2013).

حقوق النشر © 2013 SciResPub. IJOART

المجلة الدولية للتقدم في البحث والتكنولوجيا ، المجلد 2 ، العدد 8 ، أغسطس 201366

[36] عبد الوهاب ، زد ، مشالي ، إم م ، سلمان أ أ ، الشيتري ، ب أ ، فهيم ، أ أ ،


شاهد الفيديو: الإنزيمات. العوامل المؤثرة على نشاط الإنزيم (أغسطس 2022).