معلومة

النمط الجيني - / - مقابل دلتا / دلتا


في https://doi.org/10.1016/j.neuron.2018.07.033 ، بان وآخرون. استخدم التعيين TMC1 ^ دلتا / دلتا لوصف سلالة فأر تفتقر إلى جين TMC1 وظيفي. ماذا لو كان هناك اختلاف بين خط دلتا / دلتا المرتفع و - / - مرتفع في هذا السياق؟


تشير دلتا إلى أ أليل متحولة، في هذه الحالة متحولة نقطة السيستين. يشير - / - إلى متماثل اللواقح أليل فارغ، في هذه الحالة بالضربة القاضية.


تحقيق في العلاقة بين تمبرس 6 التعبير الجيني والمتغيرات الجينية والنتائج السريرية في سرطان الثدي

يعد سرطان الثدي أحد أكثر أنواع السرطانات شيوعًا بين النساء في جميع أنحاء العالم. ال تمبرس 6 (ترانسيمبرين سيرين بروتياز 6) الجين يشفر matriptase-2 ، والذي يلعب دورًا مهمًا في إرقاء الحديد باعتباره منظم الهيبسيدين وقد يلعب دورًا في التعرض لسرطان الثدي. في هذه الدراسة ، قمنا بفحص مستويات التعبير عن تمبرس 6 الجين في الأنسجة السليمة وأنسجة الورم لدى مرضى سرطان الثدي والعلاقة بين هذه المستويات والنتائج المرضية. العلاقة بين تمبرس 6 تعدد الأشكال (rs733655 ، rs5756506 ، rs2413450 ، rs855791 ، rs2235324 ، rs4820268) ومعلمات أمراض الدم للمرضى. شملت دراسة التعبير الجيني 47 مريضًا بسرطان الثدي ، وتألفت دراسة تعدد الأشكال الجينية من 181 مريضًا بسرطان الثدي و 100 من الضوابط الصحية. تم إجراء تحليل التعبير الجيني بواسطة qRT-PCR. التنميط الجيني تمبرس 6 تم إجراء تعدد الأشكال بواسطة RT-PCR. تمبرس 6 تم العثور على مستويات التعبير الجيني في أنسجة الورم لتكون 1.88 مرة أعلى من مستويات التعبير في أنسجة التحكم. درسنا العلاقة بين تمبرس 6 مستويات التعبير الجيني والبيانات المرضية ، تم العثور على علاقة ذات دلالة إحصائية بين مستقبلات هرمون الاستروجين (ER) المريض ونتائج HER2 و تمبرس 6 التعبير الجيني (على التوالي ص = 0.02 ، ع = 0.002). عندما تكون العلاقة بين تمبرس 6 تم التحقيق في تعدد الأشكال الجينية المتعلقة بتوزيع الأنماط الجينية ونتائج أمراض الدم ، وتم تحديد علاقة ذات دلالة إحصائية بين معامل تركيز الهيموغلوبين المتوسط ​​(MCHC) وتعدد الأشكال لـ rs733655 فقط. وفقًا للنتائج التي توصلنا إليها ، فإن الزيادة في تمبرس 6 يظهر التعبير الجيني في الأنسجة السرطانية أن مادة ماتريبتاز 2 قد تكون فعالة في عملية السرطان. هكذا تمبرس 6 قد تؤثر تعدد الأشكال الجينية على عملية المرض من خلال التأثير على بارامترات الدم لدى المرضى.


خلفية

فيروس دلتا التهاب الكبد (HDV) هو فيروس RNA صغير معيب مع جينوم سلبي تقطعت به السبل. يتطلب من الفيروس المساعد ، فيروس التهاب الكبد B (HBV) ، توفير بروتينات الغلاف (HBsAgs) لإكمال تجميع وإفراز الفيروس [1-3]. يبلغ طول جينوم HDV حوالي 1700 نيوكليوتيد وهو دائري الشكل ويبدو أنه يشكل بنية شبيهة بالقضيب غير متفرعة بسبب درجة عالية من الاقتران الأساسي التكميلي داخل الجزيئي [4،5]. ينقسم تسلسل الجينوم لـ HDV إلى تسلسل شبيه بالفيروس وتسلسل ترميز البروتين [1،6]. تم الافتراض أن HDV نتج عن إعادة تركيب الحمض النووي الريبي بين تسلسل فيرودي و mRNA خلوي يرمز لبروتين DIPA (بروتين متفاعل دلتا) [6،7]. كشف تحليل تسلسلات HDV من جميع أنحاء العالم أن تلك الموجودة في إفريقيا لديها أعلى تنوع ، مما يشير إلى أن أول HDV قد يكون نشأ في إفريقيا [8،9]. بعد العزل الإضافي لتسلسلات HDV الجديدة من إفريقيا ، تم تغيير تصنيف HDV من واحد يتضمن الأنماط الجينية من الأول إلى الثالث إلى واحد يتضمن الكتل من 1 إلى 8 [8].

في العقود الثلاثة الماضية ، كشفت دراسات البيولوجيا الجزيئية المكثفة إلى حد كبير عن وظائف وأدوار البروتينات المشفرة HDV في النسخ المتماثل. أثناء تكرار HDV ، يتم ترجمة تسلسل الترميز إلى مستضدين دلتا (HDAgs) ، شكل صغير وكبير (SDAg و LDAg) ، من نفس إطار القراءة يبلغ طولهما 195 و 214 حمضًا أمينيًا ، على التوالي [10،11] . يتم إنتاج LDAg من خلال عملية تُعرف باسم تحرير RNA ، والتي يتم إجراؤها بواسطة ADAR الخلوي [12،13] وهذا يحول كودون التوقف الكهرماني (UAG) من SDAg إلى كودون التربتوفان (UGG) ، مما ينتج عنه 19 أو 20 أمينًا إضافيًا الأحماض في الطرف C من LDAg [14]. SDAg ضروري لتكرار HDV بينما يعاكس LDAg وظيفة SDAg وهو مطلوب للتفاعل مع HBsAg أثناء تجميع virion والنضج [15،16]. يوجد صندوق CaaX (211 CRPQ 214 ، 211 CTPQ 214 ، و 211 CTQQ 214 في مختلف الأنماط الجينية HDV ، انظر الشكل. & # x200B الشكل 1A) 1A) عند الطرف C لـ LDAg ، والذي يعمل كإشارة لـ الأيزوبرينيل. يؤدي تحور إشارة isoprenylation لـ LDAg إلى فشل تجميع virion وإفرازه [17-19].

ميزات تسلسل الأحماض الأمينية LDAg لـ HDV والأوليغنوكليوتيدات الاصطناعية المشفرة لـ 13-amino-acid peptide of LDAg. (أ) الأحماض الأمينية (برموز من حرف واحد) محاذاة الطول الكامل لـ LDAg من الأنماط الجينية الثلاثة. النوع الجيني I من سلالة أمريكية (رقم المدخل <"type": "entrez-nucleotide" ، "attrs": <"text": "M28267" ، "term_id": "602445" ، "term_text": "M28267" >> M28267) ، النمط الجيني II من سلالة تايوان -3 (رقم الإدخال <"type": "entrez-nucleotide" ، "attrs": <"text": "U19598" ، "term_id": "1480437" ، "term_text": " U19598 ">> U19598) ، والنمط الجيني III من سلالة بيرو (رقم المدخل <" type ":" entrez-nucleotide "،" attrs ": <" text ":" L22063 "،" term_id ":" 410182 "،" term_text ":" L22063 ">> L22063). يتم عرض مجالات ربط الكلاذرين المفترضة بواسطة مربعات مستطيلة ويتم تمييز آخر 19 أو 20 من الأحماض الأمينية من LDAg بأحرف وجه عريضة. يشار إلى الأحماض الأمينية المتفق عليها لتعديل ما بعد الترجمة على النحو التالي: Ac (acetylation) في الأحماض الأمينية 72 و Pi (الفسفرة) في المواضع 2 و 123 و 177 و Py (isoprenylation) في الموضع 211. مواقف الأحماض الأمينية يشار إليها بالأرقام. (ب) تم تصميم اثنين من قليل النوكليوتيدات التكميلية للتعبير عن متواليات الأحماض الأمينية القصيرة المقابلة (كما هو موضح في الرموز المكونة من حرف واحد فوق قليل النوكليوتيدات) من LDAg. تم تصميم النهايتين 5'- و 3'من قليل النوكليوتيدات لتشمل مواقع التقييد سابقة بمعنى البيئةRI و سالأنا على التوالي. موقع التقييد الموجود بجوار سالانا هو سابقة بمعنى البيئةRV ، الذي تم تصميمه خصيصًا للسماح باختيار الاستنساخ السريع.

بالإضافة إلى تسلسل إشارة isoprenylation ، تم أيضًا تحديد إشارة تصدير نووية (NES) عند الطرف C لـ LDAg [20]. ضمن تسلسل 195-amino-acid الشائع لـ SDAg و LDAg ، تم التعرف على شكلين مفترضين من leucine-zipper ، ومخطط ربط RNA ، واثنين من إشارات التوطين النووية [21-24]. كل من SDAg و LDAg عبارة عن فسفوبروتينات بدرجة مختلفة من التعديل [25]. بعد أن تم فسفرتها بواسطة PKC [26] أو CKII [18،26] أو PKR [27] أو ERK1 / 2 [28] ، فإنها تؤثر على تكرار HDV أو تستهدف بقع SC-35 [18،26-28] . تم إثبات تأثير كل من أستلة HDAg في ليسين -72 ومثيل SDAg في أرجينين -13 على تكرار HDV [29-31]. يشير حفظ هذه المواقع اللاحقة للترجمة لـ HDAg بين جميع الأنماط الجينية HDV المعروفة إلى أن الإنزيمات الخلوية المسؤولة عن التعديلات اللاحقة للترجمة لـ HDAg جزئية على الأقل إن لم تكن جميعها متورطة في النسخ المتماثل لـ HDV.

عادةً ما تتسبب العدوى المشتركة والعدوى الفائقة لفيروس التهاب الكبد B بفيروس التهاب الكبد B في حدوث أمراض كبدية أكثر خطورة من عدوى HBV المنفردة [32]. تُظهر الأنماط الجينية المختلفة HDV توزيعات جغرافية مختلفة وترتبط بأنماط مرضية مختلفة [7،33]. يتم توزيع النمط الجيني HDV I في جميع أنحاء العالم وقد تم ربطه بمجموعة واسعة من الأمراض ، بدءًا من التهاب الكبد الخاطف إلى مرض الكبد المزمن بدون أعراض. تم العثور على النمط الجيني الثاني بشكل أساسي في آسيا ، بما في ذلك اليابان وتايوان وسيبيريا ، ويبدو أنه يتسبب في ظهور مرض أقل خطورة من النمط الجيني الأول. يوجد النمط الجيني الثالث بشكل أساسي في الجزء الشمالي من أمريكا الجنوبية وينتج عنه شكل حاد من التهاب الكبد الخاطف [ 33]. قد يبدو أن آلية التسبب في مرض HDV ناتجة عن تفاعلات معقدة بين عوامل HDV و HBV و / أو العوامل المضيفة وغير مفهومة تمامًا.

أشارت دراستان حديثتان إلى أن LDAg بدلاً من SDAg قد يلعب دورًا مهمًا في التسبب في مرض HDV [34،35]. أظهرت إحدى الدراسات ارتباطًا مباشرًا لـ LDAg بـ Smad-3 ، والذي يعدل إشارات TGF - & # x003b2 لتنشيط تعبير مثبط منشط البلازمينوجين -1 وتسلسل الإشارات المستحثة بـ c-Jun والذي يبدو أنه يؤدي إلى تليف الكبد [35]. أظهرت الدراسة الأخرى أن الشكل السيتوبلازمي لـ LDAg يرتبط بسلسلة الكلاذرين الثقيلة (CHC) واقترحت كذلك أن هذا التفاعل LDAg-CHC مطلوب لتجميع HDV. علاوة على ذلك ، يبدو أن تفاعل LDAg-CHC يتداخل مع الالتقام الخلوي الناتج عن الكلاذرين وإخراج الخلايا ، مما قد يؤدي في النهاية إلى تلف خلايا الكبد [34]. ومع ذلك ، فإن كلاثرين بوكس ​​(199 LFPAD 203) المحدد في LDAg من النمط الجيني الأول لا يتم حفظه في نفس الموضع في النمط الجيني الثاني والثالث (الشكل & # x200 ب (الشكل 1 أ). 1 أ). أجريت هذه الدراسة بهدف التحقق مما إذا كان نشاط ربط الكلاذرين محفوظًا عبر الأنماط الجينية الرئيسية الثلاثة لـ LDAgs.


تصنيف

تم الاعتراف بـ HDV من قبل اللجنة الدولية لتصنيف الفيروسات (ICTV) ، باعتباره نوعًا جديدًا من الفيروسات من الفقاريات ، والممثل الوحيد لـ Deltaviridae أسرة، دلتافيروس جنس [17]. على الرغم من أن HDV متشابه تمامًا من الناحية الهيكلية وفي طريقة النسخ المتماثل لمسببات الأمراض النباتية ، أشباه الفيروسات والفيروسات ، إلا أنه يختلف بشكل كافٍ ليتم تخصيصه لجنس منفصل. يُصنف HDV عمومًا على أنه فيروس ساتلي لـ HBV ، لأنه يعتمد على المبدأ البيولوجي القائل بأن HDV غير قادر على الإصابة في غياب HBV [14 ، 18].


مناقشة

ربطت الدراسات الحديثة من مختبرنا 10،26،27 وغيرها 28،29 ، تعبير SGTA المتغير بتكاثر الخلايا السرطانية و / أو تشخيص السرطان. هذا ليس مفاجئًا ، نظرًا لأن SGTA متورط في دورة الخلية وموت الخلايا المبرمج 5،45،46 وفي المرافقة الجزيئية المشتركة للعديد من عملاء البروتين لضمان طيهم الصحيح و / أو تجزئتهم و / أو تهريبهم 1. كل من هذه العمليات ، إذا كانت معيبة ، لديها القدرة على المساهمة في تكوين الأورام. بصرف النظر عن الدور في الفيزيولوجيا المرضية للعديد من الحالات المرضية 10،18،26،27،28،29،30،31 ، لا يُعرف الكثير عن الدور الفسيولوجي الطبيعي لـ SGTA.

في المختبر, SGTA ضربة قاضية في الكلى (NBE) 34 ، وسرطان عنق الرحم (هيلا) 5 وسرطان البروستاتا (C4-2B) 26 خلية تقلل من الانتشار والحيوية بسبب ضعف الانقسام 5،34 ، بالاقتران مع خلل في الحركة الخلوية 34 وفشل استكمال محاذاة الكروموسومات 5. بسبب هذا وحقيقة ذلك سغتا يتم التعبير عنها في كل مكان ويتم توثيق مجموعة واسعة من تفاعلات البروتين مع SGTA 1 ، وافترضنا ذلك سغتا سيكون أمرًا حيويًا للحياة وأن استئصاله في الفئران سيكون مميتًا. على العكس من ذلك ، فقد أظهرنا هنا أن ذلك ممكن سغتا - / - تم إنتاج الحيوانات من التكاثر سغتا- الفئران الناقصة ، كما هو الحال في الضربة القاضية / لأسفل لأخصائيي تقويم العظام الذين تم حفظهم من SGTA 32،33 بوصة ايليجانس ، د. ميلانوجاستر و S. cerevisiae 14 ، 15 ، 33. الميل الذي لاحظناه لأعداد مخفضة من سغتا - / - النسل بالمقارنة مع الميراث المندلي المتوقع يتوافق مع تلك الخاصة بالطفرات للبروتين المماثل المحتوي على TPR ، FKBP52 (Fkbp4) 47،48. نظرًا للأدلة المعتبرة على أن SGTA متورطة في إدخال البروتين المرتبط (TA) 16،22،49 وبما أن التكوّن الحيوي TA ضروري للتطور المبكر وقد تم ربط هذه العملية بالاجتثاث الوراثي المميت للجنين 50،51 ، فمن الممكن أن قد تساهم معالجة البروتين الشاذ TA في انخفاض غلة الحيوانات الطافرة. لا يزال سبب الوفيات قبل الولادة غير محدد ، ومع ذلك ، في حالة FKBP52 - / - ، ساهمت الخلفية الجينية في تغلغل عمل FKBP52. وهذا يعني أن الجيل المستقل من الفئران FKBP52 على خلفيات C57BL / 6J 47 و 129SvEv 48 قد أدى إلى الوفاة بنسبة 50٪ و 30٪ من الأجنة من تزاوج متغاير الزيجوت ، على التوالي. علاوة على ذلك ، فإن التهجين العكسي للطفرات FKBP52-129SvEv إلى سلالة C57BL / 6 أدى إلى تضخيم الفتك إلى ما يقرب من 100 ٪ 52 مما يسلط الضوء على التحذير من أن الجينات الأساسية لنموذج متحولة تؤثر على النمط الظاهري المقدم. ما إذا كان النمط الظاهري أكثر وضوحا من سغتا - / - كان يمكن ملاحظته إذا تم تمييزه على خلفية سلالة مختلفة من الفئران ، ولا يزال يتعين تحديده. على عكس FKBP52 - / - ، حذف البروتين المماثل ، FKBP51 (Fkbp5) ، لم يكن له أي تأثير على البقاء المبكر ولم يتسبب في تغيير النمط الظاهري في الفئران 53 ، على الرغم من ذلك FKBP51 الضربة القاضية (خلفية C57BL / 6J) بالاقتران مع حذف FKPB52 (خلفية 129SvEv) تسببت في الوفاة الكاملة في الحياة الجنينية المبكرة 54. هذا يسلط الضوء على وجود التكرار في نظام المرافقين المشتركين. تمشيا مع هذه الفكرة ، طور FKBP52 - / - الذكور خصيتين طبيعيتين ، لكنهم أظهروا إحليل تحتي في القضيب 53. زيادة FKBP51 mRNA وتعبير البروتين في الخصية FKBP52 ، ولكن ليس في القضيب ، قد يمنع بشكل فعال خلل تكوين الخصية. في سياق متماثل الزيجوت سغتا الاستئصال ، من الممكن أن يتدخل بروتين (بروتينات) مشابه هيكليًا يحتوي على TPR ، ويلبي دور SGTA في غيابه. زيادة الدناج 7 (TPR2) mRNA في المبيض قد يخدم هذا الغرض ، لكن تعبير mRNA لـ 7 بروتينات تحتوي على TPR لم يتغير في البروستاتا والخصية والغدة الثديية. ما إذا كانت التغييرات في تعبير البروتين و / أو توطين البروتين (البروتينات) المحتوية على TPR تعوض عن فقدان SGTA في علم وظائف الأعضاء العادي ، الأمر الذي يتطلب مزيدًا من البحث ويمكن أن يفسر سبب وجود حالة خفيفة فقط. سغتا-لوحظ النمط الظاهري الكامل في الدراسة الحالية. يمكن إحداث نمط ظاهري أكثر صراحة عن طريق تطبيق ضغوط على سغتاالمسوخات -null ، حيث أن المرافقين المشاركين ضرورية للطي / إعادة الطي المثلى والاتجار ببروتينات العميل المتأثرة بالإجهاد 55. في الخميرة خالية من تقويم العظام SGTA ، الرقيب -2، قلل اثنان من عوامل الإجهاد الخلوية المتميزة من قابلية الخميرة 15 والنمو وتكوين المستعمرة 20 مقارنةً بالخميرة من النوع البري. هذا يدعم أيضًا أن SGTA ضرورية في ظل ظروف خلوية معينة ومن المحتمل أن يتم تعويض خسارتها لمنع الخلل الوظيفي عند ظهور هذه الظروف.

في سغتا- الفئران غير القاتلة ، التي تضمنت نقصًا متناسبًا في وزن الجسم وطوله ، كانت أكثر التغيرات المظهرية الصريحة التي لوحظت واقتصرت على الطفرات متماثلة اللواقح. التغذية غير الكافية يمكن أن تؤدي إلى التقزم سغتا - / - النمو ، خاصة وأن فروق الوزن تتزامن مع مرحلة يقل فيها الاعتماد على الرضاعة. يبدو أن هذا ليس هو الحال ، حيث لم تتغير كفاءة التغذية فيها سغتا - / - الفئران ، على الرغم من قدرتها على امتصاص واستخدام العناصر الغذائية من الطعام المستهلك لا تزال غير معروفة. سواء سغتا أدى الاستئصال إلى تغييرات في إشارات وسطاء النمو الهرموني الذي يتطلب التحقيق ، خاصة وأن الميوستاتين 23 و GHR 12 هما بروتينات عميل SGTA. يمكن توقع التطور المعيب والكتلة المتغيرة للعضلات الهيكلية إذا سغتا أثر النقص على نضج وإشارات الميوستاتين ، وهو منظم سلبي للكتلة العضلية 56 ولكن لم يتأثر علم أمراض العضلات ولا الكتلة. GH ، الذي يعمل عبر GHR ، ضروري للنمو الجسدي والتمايز الخلوي 57 وإنتاج الباراكرين لـ IGF-1 36. تؤدي إشارات GHR الشاذة ومقاومة GH إلى توقف إنتاج IGF-1 وتقزم النمو. على الرغم من التعبير عن كل من GH و GHR بشكل طبيعي في مرحلة التطور الجنيني المبكر ، إلا أن تغيرات النمو بسبب إشارات GH المتغيرة يتم ملاحظتها فقط من d14-21 بعد الولادة في الفئران 36،58. يرتبط التقزم عند 3 أسابيع في الفئران الخالية من GHR مع ارتفاع هرمون النمو وانخفاض مستويات IGF-1 في الدورة الدموية 36،58. وبالمثل ، يؤدي تناقص عامل النمو IGF-1R الوظيفي في الفئران (IGF-1Rneo) إلى توقف النمو من 4 إلى 9 أسابيع من العمر ، وهو ما يقابل ثباتًا في الحجم ، والذي يتم الحفاظ عليه 59. مشابه لنقص GHR / IGF-1R 58،59 ، سغتاظهرت المسوخات -null على أنها أصغر جسديًا من WT في

6 أسابيع ، في ذلك الوقت كانت نسبة الإناث 93٪ والذكور 87٪ من وزن حيوانات WT. على غرار GH / GHR ، يتم اكتشاف SGTA قبل الولادة في الجنين ، لكن وظيفته أثناء التطور المبكر غير معروفة. نظرًا لتفاعلها مع عزر الالتقام المعتمد على اليوبيكيتين للسليفة و GHR الناضج ، فقد تم التكهن بـ SGTA لمنع تفاعل GHR مع آلات اليوبيكويتين أثناء نقلها من الشبكة الإندوبلازمية ، حيث توجد السلائف GHR ، إلى غشاء الخلية ، حيث وظائف GHR الناضجة 57 . يمكن أن يحدث الاتجار الشاذ GHR / IGF-1R وتدهور GHR المحتمل بوساطة ubiquitin بواسطة سغتا استئصال. نفترض أن هذا قد يساهم في توقف النمو الذي لوحظ في سغتا - / - الفئران التي توفر فقدان SGTA لا يتم تعويضها بواسطة مساعد مساعد آخر. خفض مستويات مصل وأنسجة IGF-1 في سغتا - / - قد تعكس الحيوانات إشارات GHR المعيبة ، في حين أن GH المصل المرتفع و GHR المرتفع في المبيض في سغتا - / - قد يشير إلى تعويض النقص في إشارات GH / IGF-1 ومع ذلك ، يتطلب الأخير تأكيدًا على مستوى البروتين.

على عكس حذف FKBP52 متماثل الزيجوت الذي جعل الفئران عقيمة 53 ، سغتا أثار نقص الخصوبة الخفيفة فقط في هذه الدراسة. كان الخلل في الأعضاء التناسلية الذي يعتمد على التطور الذي يحركه الأندروجين / AR هو السبب الرئيسي لتكاثر الذكور FKBP52 المعيب 53 ، في حين أن فشل غرس الرحم المعتمد على مستقبلات البروجسترون يمنح العقم في FKBP52 للإناث 48. زيادة المقاييس البديلة (AGD ، حجم القضيب والغدة القلفة) لإشارات الأندروجين في الرحم، سواء قبل سن البلوغ أو عند البلوغ ، كليًا أو جزئيًا سغتا يشير النقص إلى تغيير إشارات AR و / أو فرط الأندروجين. ومع ذلك ، فإن العديد من الأعضاء الأخرى المعتمدة على الأندروجين لم تتأثر سغتا الاجتثاث في الذكور والإناث ، كما كان تعبير mRNA عن أر والجينات المستجيبة للواقع المعزز. بغض النظر ، تأثير سغتا لا يمكن استبعاد الاستئصال على إنتاج المنشطات الجنسية.بالإضافة إلى تنظيم AR ، تُظهر SGTA أيضًا خصوصية تنظيمية لمستقبلات البروجسترون والجلوكوكورتيكويد 1،60 وبالتالي فإن تأثير استئصال SGTA على العمليات البيولوجية التي يتم التحكم فيها عن طريق إشارات البروجسترون والقشرانيات السكرية يتطلب أيضًا إجراء تحقيق في المستقبل. انخفاض نشاط المناعة النووية AR دون زيادة مصاحبة في السيتوبلازم في سغتا +/ البروستاتا ، يوحي سغتا، مثل البروتينات الأخرى المحتوية على TPR TPR2 /الدناج 7 وشريحة /كعب 1، يلعب دورًا في استقرار AR و / أو تدهوره 61. يبدو أن هذا هو الحال بالنسبة لـ GHR 12 ، حيث لا يتم تعويض استقراره في بيئة جزئية سغتا نقص.

باختصار ، قدمت هذه الدراسة لمحة أولى مثيرة للاهتمام عن الدور متعدد الأوجه لـ SGTA في الجسم الحي. يمنح الاجتثاث الكامل ، ولكن ليس الجزئي ، لـ SGTA خصوبة ويحد من جدوى ونمو النسل. تم تسليط الضوء على التفاعل المعقد بين المرافقين الجزيئيين وأهمية التكرار في أدوارهم الفسيولوجية ، لا سيما في نضوج مستقبلات الهرمونات وإشاراتها ، من خلال النتائج الحالية. هذه سغتا- النموذج الكامل قابل لمزيد من الدراسة للعديد من الاضطرابات السريرية ، بما في ذلك الأمراض المعتمدة على الهرمونات والأمراض الأميلويد بيتا ، حيث تم التورط في دور SGTA.


3 نتائج

3.1 العضلات الهيكلية TRα1 يحدد تكوين نوع الألياف في العضلات ذات النتوء البطيء ولكن يمكن الاستغناء عنه إلى حد كبير لقدرة التمرين واستتباب الطاقة

لدراسة دور إشارات مستقبلات هرمون الغدة الدرقية في العضلات الهيكلية على استقلاب الطاقة لكامل الجسم ، أنشأنا TRα الخاص بالعضلات الهيكلية.1 نموذج الماوس لفقدان الوظيفة (TRα HSACre) (الشكل S1A-C). لوحظ عدم وجود فروق في وزن الجسم والدهون والكتلة الخالية من الدهون أو تحمل الجلوكوز بين الأنماط الجينية (الشكل 1 ب-د). لم تكن سعة التشغيل الشاملة على جهاز المشي والجري الطوعي ، التي تم قياسها لمدة 6 أسابيع ، مختلفة أيضًا بين الأنماط الجينية (الشكل 1E ، F).

تم إطعام مجموعة أخرى من الحيوانات HFD لمدة 22 أسبوعًا. لاحظنا مسارًا أبطأ لزيادة الوزن بالنسبة لفئران TRα HSACre بالنسبة إلى الفئران WT استجابةً للتحدي الغذائي (الشكل 1 ح) ، والذي لا يمكن تفسيره بالاختلافات في تناول الطعام (الشكل 1I). بعد 18 أسبوعًا من التعرض للـ HFD ، كان وزن الفئران TRα HSACre يماثل وزن الفئران WT. لم يتم العثور على اختلافات في التركيب الوراثي في ​​تكوين الجسم ، أو تحمل الجلوكوز ، أو درجة حرارة الجسم استجابة لتحدي البرد المعتدل (14 درجة مئوية لمدة 4 ساعات) في الفئران التي تتغذى على HFD المتوافقة مع الوزن (الشكل 1J-L). والجدير بالذكر أن الفئران TRα HSACre أظهرت زيادة في ألياف النوع الأول وانخفاض في ألياف النوع IIA في العضلات النعلية البطيئة (SOL) مقارنة بالفئران WT (الشكل 1N). ومع ذلك ، لم يكن هذا الاختلاف موجودًا في العضلة الطويلة الباسطة ذات الإصبع السريع (EDL) (الشكل 1O). كان التبديل من نوع الألياف في العضلات ذات النتوء البطيء مصحوبًا بزيادة (72 ٪) في عامل تمايز النمو المتداول 15 (GDF15) ، وهو علامة نظامية للإجهاد الخلوي والميتوكوندريا (الشكل 1P).

3.2 TRα1 في العضلات الهيكلية مطلوب لإنفاق الطاقة الناجم عن T3 ولكن يمكن الاستغناء عنه للارتفاع الناجم عن T3 في درجة حرارة الجسم

لدراسة أهمية العضلات الهيكلية TRα1 على إنفاق الطاقة الناجم عن هرمون الغدة الدرقية ، تم علاج خمس مجموعات مختلفة من الفئران TRα HSACre و WT يوميًا لمدة 5 أو 7 أو 14 يومًا باستخدام s.c. حقن T3 أو السيارة. كانت تركيزات البلازما من T3 و T4 متشابهة بين عناصر التحكم العجاف المعالجة بالمركبة و DIO TRα HSACre و WT (الشكل 2A-C ، F-H). كما هو متوقع ، أدى علاج T3 إلى زيادة T3 ولكنه انخفض تركيزات البلازما T4 بعد 7 أيام من علاج T3 (100 نانومول / كجم) وبدون اختلافات بين الأنماط الجينية (الشكل 2 ب ، ج ، ز ، ح). كشفت المسعرات غير المباشرة عن زيادة في إنفاق الطاقة استجابة لعلاج T3 في كل من الفئران الخالية من الدهون والسمنة (الشكل 2D ، E ، I ، J ، الشكل S2A ، B). لم يؤدي علاج T3 إلى زيادة كبيرة في إنفاق الطاقة في فئران TRα HSACre الخالية من الدهون (الشكل 2 د ، هـ). في الفئران DIO WT كان تأثير T3 على معدل الأيض أكثر وضوحًا من الفئران النحيلة WT مما يشير إلى أن التأثير الحراري لـ T3 مرتبط بكتلة الدهون. في هذا السياق ، قد يكون عدم وجود وظيفة TRα1 في العضلات سيكون لها تأثير أقل على إنفاق الطاقة في الفئران DIO مقارنة بالفأر النحيل. وفقًا لذلك ، خلال النهار ، كانت الزيادة في معدل الأيض بوساطة T3 مماثلة في الفئران WT و TRα HSACre ، بينما خلال المرحلة المظلمة ، لوحظت زيادة في إنفاق الطاقة بوساطة T3 فقط في الفئران WT (الشكل 2I ، J). الزيادة المتتالية في إنفاق الطاقة المحفز T3 في فئران DIO مماثلة لما لاحظناه سابقًا في هذا النموذج الغذائي. 11

لفك تشفير التأثير الخاص بالعضلات لـ T3 على تنفس الميتوكوندريا في الفئران WT و TRα HSACre ، تم استئصال عضلات النشل البطيء (SOL) وعضلات النشل السريع (EDL) من الفئران المعالجة بـ T3 وتقييمها لقدرة الجهاز التنفسي للميتوكوندريا (الشكل 2K ، لام). في SOL ، كان تنفس التسرب (الحالة 2) مشابهًا بين الأنماط الجينية ، ولكن في سياق علاج T3 ، زاد التنفس فقط في الفئران WT ، مما يعكس بيانات قياس السعرات الحرارية غير المباشرة لكامل الجسم (الشكل 2K). كشفت قدرة الفسفرة المؤكسدة مع الركيزة المعقدة I المرتبطة عن ضعف التنفس في SOL في الحالة غير المحفزة في الفئران TRα HSACre بالنسبة لفئران WT. حدد تقييم التنفس المرتبط بـ I- والمعقد I + II أن تحفيز T3 في TRα HSACre يرفع التنفس إلى حد مماثل لتلك الموجودة في الفئران WT. لم يلاحظ أي اختلافات في التنفس الميتوكوندريا في EDL (الشكل 2L).

إن الآليات التي تعمل بها هرمونات الغدة الدرقية على زيادة درجة حرارة الجسم بعيدة المنال. لاختبار دور محتمل للعضلة TRα1 في ارتفاع درجة حرارة الجسم بوساطة T3 ، قمنا بقياس درجة حرارة الجسم الأساسية في الفئران WT و TRα HSACre التي عولجت يوميًا إما باستخدام T3 أو السيارة لمدة 7 أيام. بالاتفاق مع الدراسات السابقة ، أدى علاج T3 إلى ارتفاع كبير في درجة حرارة الجسم في الفئران WT في كل من درجة حرارة الغرفة المحيطة (22 درجة مئوية) وتحت ظروف متعادلة الحرارة (30 درجة مئوية) (الشكل 2M ، N). والجدير بالذكر أن الفئران TRα HSACre المعالجة بـ T3 استجابت بشكل مشابه لفئران WT المعالجة بـ T3 من حيث زيادة درجة حرارة الجسم عند كل من 22 درجة مئوية و 30 درجة مئوية (الشكل 2M ، N). علاوة على ذلك ، لم يلاحظ أي فروق تعويضية في وزن BAT أو تعبير بروتين UCP1 في BAT و iWAT في الفئران DIO TRα HSACre بالنسبة إلى الفئران DIO WT استجابةً لـ 14 يومًا من T3 أو علاج السيارة (الشكل S2C-G). تشير هذه النتائج معًا إلى أن 1) إشارات هرمون الغدة الدرقية في العضلات الهيكلية لا تساهم في حمى الغدة الدرقية التي يسببها T3 ، و 2) زيادة هرمون الغدة الدرقية في إنفاق الطاقة والحمى الناجم عن T3 ليسا عمليتين مترابطتين تمامًا.

3.3 تهيمن المسارات الهيكلية والاستقلابية على النسخ استجابة لتفعيل T3 بوساطة TRα1 في عضلة النعل

لتشريح الأسس الميكانيكية للتحريض المرتبط بالعضلات في إنفاق طاقة الجسم بالكامل استجابةً للعلاج T3 ، أجرينا تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA-seq) لـ WT و TRα HSACre SOL من كل من الحالات المعالجة وغير المعالجة. كشفت هذه التحليلات أنه تم التعبير عن 788 نسخة تفاضلية بين WT SOL و TRα HSACre SOL (الشكل 3 أ). في ظل الظروف غير المحفزة ، تم التعبير عن جينات متعددة مرتبطة بتكوين نوع الألياف ومورفولوجيا العضلات بشكل تفاضلي في الفئران TRα HSACre مقارنة مع الفئران WT (الشكل 3 أ). علاوة على ذلك ، كانت الجينات المرتبطة بتوليد حرارة العضلات ، مثل sarcolipin و MSS51 ، مختلفة بين الأنماط الجينية. استجابة للعلاج T3 ، حدد التنميط التعبيري إثراء الجينات بمصطلحات علم الوجود "تخليق NADP الحيوي" و "استقلاب الأحماض الأمينية المتفرعة السلسلة (BCAA)" ليتم تنظيمها بشكل تفاضلي في الفئران WT بالنسبة لفئران TRα HSACre (الشكل 3 ب). كشف التعبير النسبي لأعلى النصوص المستجيبة لـ T3 في SOL من الفئران WT بالمقارنة مع الفئران TRα HSACre عن تمييز واضح في تنظيم النسخ (الشكل 3C ، الشكل S3A). والجدير بالذكر أن استجابة نسخية واضحة في SOL لإدارة T3 النظامية ظلت على الرغم من طفرة TRα1 في العضلات. قد يعكس هذا التأثيرات النظامية لـ T3 التي تقدم لاحقًا تأثيرات ثانوية على ترنسكربيتوم العضلات. أظهر تقييم الجينات الرئيسية المشاركة في التوليد الحراري للعضلات (الشكل ثلاثي الأبعاد) ومورفولوجيا الألياف العضلية (الشكل 3E) تعبيرًا تفاضليًا بين الفئران WT وفئران TRα HSACre في كل من الظروف غير المحفزة والناجمة عن T3. والجدير بالذكر أن الزيادة غير المحفزة في sarcolipin mRNA في الفئران TRα HSACre كانت واضحة أيضًا في EDL و gastrocnemius وعضلات الفخذ الرباعية (الشكل S3B). تم فحص العلامات المرتبطة بالتوليد الحراري لأفضل التقنيات المتاحة وإشارات هرمون الغدة الدرقية في أفضل التقنيات المتاحة لتحديد خصوصية TRα1التغييرات المرتبطة بنسخ العضلات (الشكل 3 هـ). بينما يؤثر T3 بوضوح على النصوص المشاركة في التوليد الحراري لأفضل التقنيات المتاحة ، لم يلاحظ أي تعبير تفاضلي بين فئران TRα HSACre بالنسبة لفئران WT ، مما يعني أن الطفرة الخاصة بالعضلات ليس لها "انسكاب" نظامي لبرامج التمثيل الغذائي في الأنسجة الحرارية الأخرى (الشكل 3F) .


تحليل التباين الجيني في CD40 و CD40L: العلاقة مع التعبير النسبي لـ mRNA والبروتينات القابلة للذوبان في متلازمة الشريان التاجي الحادة

1 Instituto de Investigación en Ciencias Biomédicas (IICB)، Centro Universitario de Ciencias de la Salud (CUCS)، Universidad de Guadalajara (UdeG)، Sierra Mojada # 950، Colonia Independencia، C.P، 44340 Guadalajara، Jalisco، Mexico

2 Doctorado en Ciencias Biomédicas، Centro Universitario de Ciencias de la Salud (CUCS)، Universidad de Guadalajara (UdeG)، Guadalajara، Jalisco، Mexico

3 Doctorado en Genética Humana، Centro Universitario de Ciencias de la Salud (CUCS)، Universidad de Guadalajara (UdeG)، Guadalajara، Jalisco، Mexico

4 Especialidad en Cardiología، Unidad Médica de Alta Especialidad، Centro Médico Nacional de Occidente (CMNO)، Departamento de Cardiología، Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS)، Guadalajara، Jalisco، Mexico

الملخص

يمكن أن تحدث متلازمة الشريان التاجي الحادة (ACS) بسبب وجود عوامل التهابية تعزز تنشيط الخلايا المناعية بواسطة جزيئات التكلفة مثل CD40 و CD40L. العوامل البيئية والوراثية متورطة في مسببات الـ ACS. كان الهدف من هذه الدراسة هو استكشاف التعبير الجيني والبروتيني المرتبط به CD40 و CD40L المتغيرات الجينية في مرضى ACS من سكان غرب المكسيك. تم تجنيد ما مجموعه 620 فردًا من غرب المكسيك: تم تقييم 320 مريضًا من مرضى ACS و 300 فرد ليس لديهم تاريخ من اعتلال القلب الإقفاري. تم تحديد النمط الجيني باستخدام مقايسات التنميط الجيني TaqMan SNP. CD40 و CD40L تم قياس التعبيرات على مستوى mRNA باستخدام مقايسات TaqMan Gene Expression. تم قياس الأشكال الإسوية للبروتين القابل للذوبان بواسطة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم. لم نعثر على دليل على الارتباط بين CD40 (rs1883832 و rs4810485 و rs11086998) و CD40L (rs3092952 و rs3092920) المتغيرات الجينية وقابلية الإصابة بالـ ACS ، على الرغم من ارتباط rs1883832 و rs4810485 بشكل كبير بمستويات البلازما المرتفعة sCD40. يمكن أن تتأثر مستويات البلازما لـ sCD40L بالجنس والطيف السريري لمتلازمة الشريان التاجي الحادة. نتائجنا لا تشير إلى دور وظيفي CD40 و CD40L المتغيرات الجينية في ACS. ومع ذلك ، يمكن أن تعكس العملية الالتهابية وتنشيط الصفائح الدموية لدى مرضى ACS ، حتى عندما يكونون تحت العلاج الدوائي. نظرًا للأدوار المهمة لنظام CD40-CD40L في التسبب في الإصابة بالـ ACS ، يلزم إجراء دراسات طولية لتحديد ما إذا كانت المستويات القابلة للذوبان من CD40 و CD40L يمكن أن تكون علامات مفيدة سريريًا لحدث قلبي وعائي متكرر بعد ACS.

1 المقدمة

أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفاة في جميع أنحاء العالم [1] ، وتحديداً متلازمة الشريان التاجي الحادة (ACS) التي تتميز بالانخفاض الحاد في تدفق الدم التاجي ونقص تروية عضلة القلب أو نخرها. هناك ثلاثة كيانات سريرية مميزة: احتشاء عضلة القلب بارتفاع مقطع ST (STEMI) ، احتشاء عضلة القلب غير المرتفع للقطعة ST (NSTEMI) ، والذبحة الصدرية غير المستقرة (UA) ، مع مسببات مشتركة ومع ذلك ، قد يكون لها نتائج مختلفة [2]. لهذا السبب ، فإن الإنذار المبكر وتصنيف المخاطر هو خط العمل الأول لتقليل مخاطر النوبات المتكررة أو حتى الوفاة بعد متلازمة الشريان التاجي [3].

في مسببات الـ ACS ، هناك عوامل استقلابية ، وراثية ، وبيئية ، من بين عوامل أخرى متضمنة ، الحالات التي يمكن أن تزيد الالتهاب والخلل البطاني ، وهي عناصر أساسية في تطور تصلب الشرايين [4 ، 5]. تم تقدير أن النسبة المئوية للتوريث هي 40-55٪ من التباين بين الأفراد في خطر الإصابة بالـ ACS التي تدعم التأثير الجيني الكبير [6].

CD40 هو جزيء تكلفة يتم التعبير عنه بشكل أساسي في الخلايا الليمفاوية B ويتم التعبير عنه في خلايا أخرى مثل الخلايا الأحادية والبلاعم والخلايا البطانية (ECs) وخلايا العضلات الملساء (SMCs) [7]. يتم التعبير عن يجنده ، CD40L ، بشكل أساسي على سطح الصفائح الدموية (95٪) ، الخلايا الليمفاوية التائية ، ECs ، SMCs ، والضامة [7 ، 8].

يشارك تفاعل CD40 و CD40L في التسبب في المرض المناعي للـ ACS [9] نظرًا لمشاركته في تنشيط الخلية ثنائي الاتجاه من خلال مسارات الإشارات c-Jun و NF-κB ، و ERK 1/2 ، يعززان زيادة جزيئات الالتصاق ، وإفراز السيتوكينات المنشطة للالتهابات ، وتنشيط الصفائح الدموية [7]. ومع ذلك ، فقد ارتبطت الأشكال القابلة للذوبان من CD40 و CD40L بخلل وظيفي في بطانة الأوعية الدموية أو كعلامات لأحداث قلبية وعائية ضائرة في مرضى ACS [10 ، 11] مما يوحي بهم كأهداف محتملة للعوامل العلاجية [9].

في هذا الصدد ، تم تحديد تعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات (SNPs) في CD40 و CD40L الجينات التي قد تزيد من القابلية لتطوير ACS ، من خلال دراسات الارتباط على مستوى الجينوم [7] ودراسات الجينات المرشحة [12-16]. ارتبطت هذه المتغيرات الجينية بأمراض التهابية وأمراض المناعة الذاتية [17 ، 18] ، مع تغيرات في CD40 و CD40L تعبير mRNA [19-25] وكذلك تنظيم الأشكال القابلة للذوبان لتعديل وظيفتها [15 ، 20] والتي لها تأثير في بدء وتطور وتطور تصلب الشرايين [26 ، 27].

يعد الالتهاب والخلل البطاني من العوامل التي تعزز تطور تصلب الشرايين ، ومع ذلك ، فإن التفاعلات الخلوية والجزيئية الكامنة ، والتي تربط عوامل الخطر الحالية بعملية تصلب الشرايين ، ليست مميزة بشكل جيد. على حد علمنا ، لا توجد دراسات تقيم مساهمة CD40 و CD40L تعدد الأشكال في السكان من غرب المكسيك المرتبطة بأمراض القلب والأوعية الدموية على وجه التحديد مع ACS.

وفقًا لذلك ، كان الهدف من هذه الدراسة هو استكشاف العلاقة بين تعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات في CD40 (rs1883832 (c.-1C & gtT) ، rs4810485 (c.51 + 914G & gtT) ، و rs11086998 (c.679C & gtG)) و CD40L (rs3092952 (g.1615A & gtG) و rs3092920 (18656G & gtT)) الجينات والقابلية للإصابة بـ ACS. نستكشف أيضًا العلاقة بين هذه الأشكال المتعددة مع CD40 و CD40L التعبير في كريات الدم البيضاء في الدم المحيطي والمستويات القابلة للذوبان في عينات البلازما التي تم الحصول عليها من مرضى ACS والأشخاص غير المصابين باعتلال القلب الإقفاري المتضمن في مجموعة التحكم (CG).

2. المواد والأساليب

2.1. مرضى ACS والموضوعات في مجموعة التحكم

تكونت مجموعة الدراسة من 320 مريضًا تم تشخيص إصابتهم بالـ ACS المصنفين وفقًا للكلية الأمريكية لأمراض القلب [28] و 300 شخص يعانون من عوامل خطر الإصابة بالـ ACS ولكن ليس لديهم تاريخ من اعتلال القلب الإقفاري (تم التأكد من ذلك من خلال الاستبيان) مثل CG. تم تجنيد جميع الأفراد المشمولين في الدراسة من غرب المكسيك من Hospital de Especialidades del Centro Medico Nacional de Occidente del Instituto Mexicano del Seguro Social (CMNO-IMSS). كانت فترة الدراسة من فبراير 2016 إلى يونيو 2018.

2.2. الاعتبارات الاخلاقية

أجريت الدراسة وفقًا لإعلان هلسنكي لعام 2013. وافق جميع الأفراد على المشاركة في الدراسة ووقعوا موافقة خطية مستنيرة. تم الحصول على الموافقة الأخلاقية من قبل Centro Universitario de Ciencias de La Salud (CUCS) ، UdeG (CI / 065/2014).

2.3 التنميط الجيني ومراقبة الجودة

كانت المتغيرات الجينية هي التنميط الجيني باستخدام مقايسات TaqMan لـ CD40 (rs1883832 (C__11655919_20) ، rs4810485 (C___1260190_10) ، و rs11086998 (C___1260325_10)) ول CD40L (rs3092952 (C__26154899_10) و rs3092920 (C__27452204_10)) باستخدام TaqMan Genotyping Master Mix (Applied Biosystems، Foster City، CA، USA) ، باتباع بروتوكول الشركة المصنعة. كمراقبة للجودة ، تم إجراء تنميط وراثي مزدوج التعمية بنسبة 25 ٪ من العينات لجميع الأشكال المتعددة ، مع عدم وجود اختلاف في تخصيص النمط الجيني.

2.4 تحليل PCR في الوقت الحقيقي

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من كريات الدم البيضاء في الدم المحيطي باستخدام كاشف TRIzol (Invitrogen ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة للحصول على إجمالي الحمض النووي الريبي وفقًا لطريقة Chomczynski و Sacchi [29]. تم نسخ ميكروغرام واحد من إجمالي RNA باستخدام كواشف النسخ العكسي للحصول على cDNA وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (Promega Corporation ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إجراء PCR في الوقت الحقيقي باستخدام تحقيقات TaqMan: نازع هيدروجين الغليسرالديهيد 3 فوسفات (جابده) (Hs02786624_g1) ، CD40 (Hs01002915_g1) ، و CD40L (Hs00163934_m1) وفقًا للشروط الموضحة في بروتوكول مقايسة التعبير الجيني TaqMan (النظم البيولوجية التطبيقية ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام نظام Roche LightCycler 96®. تم تطبيع التعبير النسبي إلى مستوى التعبير باستخدام جابده كعنصر رقابة داخلي وتم تقييمه باستخدام طرق 2 -ΔΔCq و 2 -ΔCq [30]. يتم التعبير عن النتائج كزيادة أضعاف نسبية مقارنةً بالتحكم والوحدة النسبية للتعبير (URE) ، على التوالي. تم حساب طريقة 2 -∆∆Cq على النحو الذي اقترحه ليفاك وشميتجن [30] والهدف من هذه الطريقة هو مقارنة مقاييس التعبير عن جينات المصالح من خلال التطبيع مع جين مرجعي في هذه الحالة GAPDH. باستخدام المعادلة التالية:

، حيث يشير معاير Cq إلى متوسط ​​Cq لمجموعة التحكم. حددنا التعبير النسبي CD40 mRNA في كريات الدم البيضاء في الدم المحيطي من مرضى ACS (

). لتقييم مستويات التعبير ، كانت خصائص الفوج على النحو التالي: العمر (

) ، والجنس (نسبة الإناث / الذكور ACS: 1.7 ، CG: 1.6) ، ووجود عامل خطر مماثل ، وتم تضمين نفس العدد من المرضى لكل من الكيانات السريرية الثلاثة لـ ACS (14 UA ، 14 NSTEMI ، و 14 STEMI ).

2.5 الكشف عن sCD40 و sCD40L و IFN-γ

مستويات sCD40 و sCD40L و IFN-γ تم تحديدها على عينات البلازما باستخدام مقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) (Human CD40 Quantikine ELISA Kit و Human CD40 Ligand Quantikine و Human IFN-gamma Quantikine ELISA Kit و R & ampD Systems) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة. حساسية المقايسة لـ sCD40 و sCD40L و IFN-γ كان 5.56 بيكوغرام / مل ، 10.1 بيكوغرام / مل ، و 8 بيكوغرام / مل على التوالي.

2.6. تحليل احصائي

تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام برنامج SPSS الإصدار 22 (SPSS Inc. ، شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تقديم البيانات كمدى متوسط ​​وربعي (IQR) ما لم يُذكر خلاف ذلك. مان ويتني

تم استخدام الاختبار واختبار Kruskal-Wallis لمقارنة الاختلافات بين المجموعات. ترددات التركيب الوراثي والأليل CD40 و CD40L تمت مقارنة المتغيرات الجينية بين مرضى ACS ومجموعة التحكم. تم حساب نسب الأرجحية (OR) وفواصل الثقة 95٪ (CIs) باستخدام مربع كاي واختبارات فيشر الدقيقة عند الاقتضاء. تم تطبيق تصحيح Bonferroni لتقليل الخطأ الإحصائي من النوع 1 (الكمبيوتر) في مقارنات متعددة. تم حساب توازن هاردي واينبرغ من توزيع النمط الجيني ، وتم حساب اختلال التوازن (LD) بين الأشكال المتعددة باستخدام Lewontin’s

بين العلامات الجينية. تم تقدير الأنماط الفردانية وتردداتها باستخدام منصة برمجيات SHEsis (http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php). تم استخدام نموذج الانحدار متعدد الخطوط لتقدير ارتباط عوامل الخطر الشائعة (الأمراض المصاحبة ، والجنس ، وتناول الأدوية ، وما إلى ذلك) مع مستويات التعبير sCD40 و sCD40L و mRNA. تم التأكد من تحليل الارتباط من خلال ارتباط سبيرمان.

3. النتائج

3.1. المظاهر السريرية

تم تسجيل المعلومات السريرية لمرضى الـ 320 من مرضى الـ ACS و 300 شخص تحكم في الجدول 1. كان متوسط ​​عمر مرضى الـ ACS وموضوعي الـ CG 62 (± 11 انحراف معياري (SD)) و 55 (± 10 SD) سنة ، على التوالي. في مجموعة ACS ، هناك 3.32 ذكر أكثر من الإناث بينما في CG ، كانت نسبة الذكور / الإناث 1/1 تقريبًا. قدم مرضى ACS مستويات عالية من علامات وظائف القلب بما في ذلك CK و CK-MB و تروبونين 1 فيما يتعلق بالقيم المرجعية ، فإن المعلمات الكيميائية الحيوية مرتفعة بشكل ملحوظ في مرضى ACS مقارنةً بالسيطرة كما هو موضح في الجدول 1. عوامل الخطر ذات الانتشار الأعلى في ACS كان ارتفاع ضغط الدم والتدخين والسكري من النوع 2. تم العثور على إعادة احتشاء في 49 حالة (15.3 ٪). تضمن تناول الدواء مضادات الصفيحات (حمض أسيتيل الساليسيليك ، كلوبيدوجريل) ، الستاتين ، مضادات التخثر (الهيبارين والإينوكسابارين) ، والعوامل الخافضة للضغط (كابتوبريل ، إنالابريل ، سبيرونولاكتون ، وفوروسيميد).

اختبار ACS: متلازمة الشريان التاجي الحادة Apo AI: صميم البروتين AI Apo B: البروتين الشحمي B CG: مجموعة التحكم CK: الكرياتينين كيناز CK-MB: الكرياتينين كيناز العضلات والدماغ CRP: البروتين التفاعلي C HDL-c: البروتين الدهني عالي الكثافة IQR: بين ربعي النطاق LDL-c: البروتين الدهني منخفض الكثافة NSTEMI: احتشاء عضلة القلب غير المرتفع للقطعة ST NA: غير قابل للتطبيق UA: الذبحة الصدرية غير المستقرة STEMI: احتشاء عضلة القلب بارتفاع مقطع ST (STEMI). تم التعبير عن البيانات كمدى متوسط ​​وربعي (Q25-Q75) ما لم يُذكر خلاف ذلك. (أ) البيانات الواردة في

3.2 تحليل التركيب الجيني والأليل

النمط الجيني وترددات الأليل لـ CD40 (rs1883832 و rs4810485 و rs11086998) و CD40L (rs3092952 و rs3092920) تظهر الأشكال المتعددة في الجداول 2-4. وافقت توزيعات النمط الجيني مع توقعات توازن هاردي واينبرغ (

قيمة النموذج الأليلي بين الجنسين.

أو: نسبة الأرجحية. يتم تمثيل Haplotype بـ rs1883832 و rs4810485 و rs11086998 على التوالي.

لا التركيب الوراثي ولا توزيع الأليل لثلاثة CD40 كان تعدد الأشكال مختلفًا إحصائيًا عند مقارنة ACS ومجموعات التحكم.

لأن CD40L يقع على كروموسوم X ، أجرينا التحليل حسب الجنس (الجدول 3). من الجدير بالذكر أننا لم نجد اختلافات في ترددات الأليل CD40L المتغيرات بين الجنسين (rs3092952 A / G:

). كان التوزيع الجيني لكل من تعدد الأشكال متشابهًا بين المرضى والضوابط إما مجمعة (بيانات غير معروضة) أو مفصولة بين الجنسين.

3.3 تحليل النمط الفردي CD40 و CD40L

قمنا بتحليل الارتباط بين الأنماط الفردانية الموجودة في مجموعتنا المكسيكية الغربية من جينات CD40 / CD40L و ACS. أظهر التحليل أن rs1883832 و rs4810485 و rs11086998 من CD40 كانت في اختلال التوازن (، ،). وجدنا نمط فرداني رئيسي واحد (CCG) يمثل 67.1٪ و 65.5٪ في مرضى ACS والأشخاص الضابطة ، على التوالي. وجدنا أيضًا نمطًا فردانيًا وقائيًا (CTC ، OR: 0.22) (الجدول 4).

CD40L لم تكن الأشكال المتعددة في LD () ، مما يشير إلى ضرورة تحليل 3092952 و rs3092920 بشكل منفصل.

3.4. CD40 تعبير مرنا

أظهر مرضى ACS تعبيرًا متوسطًا أعلى لـ CD40 mRNA في كريات الدم البيضاء في الدم المحيطي مقارنة بالضوابط (0.82 ضعفًا أكثر) ، ومع ذلك ، لم تكن هذه المقارنة مهمة. وبالمثل ، فإن التقسيم الطبقي عن طريق التشخيص السريري في مجموعة ACS (UA و NSTEMI و STEMI) يشير إلى عدم وجود فروق في مستوى تعبير mRNA عن CD40. بعد ذلك ، قمنا بتحليل البيانات من مرضى ACS و CG طبقي النتائج عن طريق حمل الأنماط الجينية rs1883832 و rs4810485 و rs11086998. بسبب الترددات المنخفضة للأليلات الثانوية ، افترضنا نموذج الارتباط السائد (rs1883832: C / C مقابل C / T + TT ، r4810485: G / G مقابل G / T + TT ، و rs11086998: C / C مقابل C / G + G / G) رغم أننا لم نجد فروقا في مستوى CD40 التعبير بين المتغيرات الجينية في أي من المجموعتين (البيانات غير معروضة).

3.5. CD40L تعبير مرنا

أظهر التحليل بواسطة طريقة 2 -ΔΔCq ذلك CD40L كان تعبير mRNA في مرضى ACS أعلى بمقدار 1.25 ضعفًا من ذلك في CG (الشكل 1 (أ)) تم التأكد من هذا الاختلاف بشكل كبير من خلال طريقة 2-Cq (ع =0.035) (الشكل 1 (ب)). حسب الكيانات السريرية ، لم نجد أي فرق (البيانات غير معروضة).

). ACS: متلازمة الشريان التاجي الحادة CG: مجموعة التحكم.

بالنظر إلى الموقع على الكروموسوم X واستنتاج الدراسات الأخرى أن CD40L يمكن أن يتأثر تعبير mRNA بالجنس [20] ، قمنا بتحليله بشكل منفصل لكل جنس في كلا المجموعتين من الدراسة دون أي دليل على الارتباط. حسب الجنس ، يميل المرضى الذكور أو الإناث إلى إظهار المزيد من التعبير مقارنة بالمجموعة الضابطة (الشكل 2 (أ)). عندما قمنا بالتقسيم الطبقي من خلال التشخيص السريري للـ ACS والجنس ، أظهرت مريضات UA أعلى تعبير (5.12 URE) ، على الرغم من عدم وجود أي مقارنات ذات دلالة إحصائية (المرضى الذكور ، والمرضى الإناث ،) (الشكل 2 (ب)).

من المهم أن نذكر أننا اكتشفنا CD40L مرنا التعبير في مجموعتي الدراسة وفقًا للمتغيرات الجينية (rs3092952 و rs3092920) ، وفقًا للنموذج السائد ، ومع ذلك ، لم نجد اختلافات.

3.6 الارتباط بين sCD40 و sCD40L مع ACS

قمنا بتقييم مستويات البلازما من CD40 و CD40L في كلا مجموعتي الدراسة. وجدنا أن مرضى ACS يقدمون مستويات أعلى بكثير من sCD40 () مقارنة مع مجموعة التحكم (843.3 مقابل 492 بيكوغرام / مل). يشير نموذج الانحدار متعدد الخطوط إلى أن هذا الارتباط يمكن إخفاءه بواسطة clopidogrel (). يبدو أن تشخيص ACS غير مرتبط بـ sCD40 (UA: 677.1 بيكوغرام / مل NSTEMI: 661.7 بيكوغرام / مل و STEMI: 782.4 بيكوغرام / مل ،).

كما تم تحليل الاختلافات بين مستويات sCD40 بين المتغيرات الجينية CD40 بافتراض نموذج الارتباط السائد. كما هو مبين في الشكل 3 ، كان لدى ناقلات C / C مستويات أعلى من sCD40 في البلازما من rs1883832 C / T + T / T (561 مقابل 475.7 بيكوغرام / مل ،). وبالمثل ، أظهرت ناقلات متماثلة اللواقح لـ rs4810485 تركيزًا أعلى من CD40 القابل للذوبان من ناقلات G / T + T / T (562.5 مقابل 489.7 بيكوغرام / مل ،).

في مرضى ACS ، لم يكن هناك ارتباط بين هذه المتغيرات الجينية CD40 ولا ارتباط بين CD40 rs11086998 تعدد الأشكال مع مستويات البلازما CD40 في كلا مجموعتي الدراسة بافتراض أن النموذج السائد للارتباط C / C مقابل C / G + G / G (ACS: 846 بيكوغرام / مل مقابل 725 بيكوغرام / مل ، CG: 509 بيكوغرام / مل مقابل .540 بيكوغرام / مل ،) (الشكل 4).

فيما يتعلق بمستويات البلازما sCD40L ، أظهر المرضى مستويات أعلى من sCD40L مقارنة بالمجموعة الضابطة ، ومع ذلك ، لم تصل هذه المقارنة إلى دلالة إحصائية (1080 مقابل 868.9 بيكوغرام / مل ،). وفقًا لتشخيص ACS و sCD40L المقسم حسب الجنس ، كان لدى المرضى الإناث المصابات بمرض STEMI مستويات أعلى مقارنة بالمرضى الإناث UA (1489.5 مقابل 533.8 بيكوغرام / مل ،). قدم المرضى الذكور UA مستويات أعلى من sCD40L مقارنة بالمرضى الإناث UA (1714.3 مقابل 533.8 بيكوغرام / مل ، الشكل 5). عند تجميعها ، كانت مستويات sCD40L متشابهة من خلال تشخيص ACS (، البيانات غير معروضة).

لم يكن للأدوية تأثير كبير على البلازما sCD40L في مجموعة ACS عند تقديمها في نموذج العدوان المتعدد (

: 0.003 ،) أي الاختلافات بين المرضى الذين يعانون من ACS من sCD40L لا يحركها الدواء.

قمنا بتحليل الارتباط بين المتغيرات الجينية على CD40L ومستويات البلازما من sCD40L في كلا مجموعتي الدراسة دون أي دليل على وجود ارتباط.

أخيرًا ، لاحظنا وجود ارتباط خطي إيجابي بين sCD40L و IFN-γ في مرضى ACS (،) (الشكل 6).

4. مناقشة

CD40 و CD40L لهما وظائف مهمة تشمل التنشيط الخلوي وإنتاج السيتوكينات المنشطة للالتهابات. هذا يعزز الالتهاب الذي يمكن أن يسرع من عمليات تصلب الشرايين وله دور وظيفي في تطور أمراض القلب والأوعية الدموية [8]. لذلك ، كانت المتغيرات الجينية ذات أهمية لعلاقتها بزيادة خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية [14 ، 15].

SNP على CD40 الجين ، rs1883832 ، مرتبط بـ ACS في وجود أليل C الرئيسي وقد ارتبط بانخفاض مستويات sCD40 في وجود أليل T الثانوي وخطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية [31 ، 32]. في مجموعة غرب المكسيك ، لم يتم تحديد هذا كعامل خطر وراثي لالتهاب المفاصل الروماتويدي (RA) [25]. ارتبط تعدد الأشكال هذا بتناقص تعبير الرنا المرسال لـ CD40 [21 ، 22] تم العثور على rs1883832 في LD مع rs4810485 ، ويرتبط الأخير بشكل كبير بتشكيل آفة الشريان التاجي في السكان التايوانيين [33]. بالنظر إلى التوطين في المنطقة 5 UTR و intron 1 من هذه SNPs ، على التوالي ، فقد ارتبطوا بالتغييرات في تعبير mRNA لأنهم في LD كامل تقريبًا مع rs6074022 ، والذي يتواجد داخل مروج CD40 ويؤثر على مستويات mRNA [20 ]. خلاف ذلك ، على حد علمنا ، لم يتم ربط rs11086998 كعامل خطر وراثي في ​​أمراض القلب والأوعية الدموية ، ولكن من المعروف أنه مرتبط بتعديل مستويات السيتوكينات المسببة للالتهابات ، TNFα و IL-6 ، لأنه يتواجد على exon 9 لترميز بروتين المجال داخل الخلايا المتورط في مسارات إشارات CD40 [34].

تم تحديد هذه الأشكال المتعددة سابقًا على أنها علامات وراثية لأمراض القلب والأوعية الدموية بشكل رئيسي في السكان الصينيين والأوروبيين: Li et al. درس 160 مريضًا بالـ ACS و 92 عنصر تحكم في سكان الصين الهان [12] Tian et al. حلل 248 مريضًا بالـ ACS و 206 من الضوابط في الصينيين [13] Wang et al. أبلغ عن التحليل في 474 مريضًا يعانون من لويحات تصلب الشرايين التاجية و 225 عنصر تحكم في الصينيين [14] و García-Bermúdez et al. حلل 290 مريضًا مصابًا بالتهاب المفاصل الروماتويدي (RA) مع أحداث قلبية وعائية و 1285 مريضًا مصابًا بالتهاب المفاصل الروماتويدي ولكن بدون أحداث قلبية وعائية [17]. ومع ذلك ، في دراستنا ، لا يمكننا دعم هذا الارتباط. يمكن تفسير ذلك بالاختلافات الجينية بين السكان [35]. تم العثور على المتغيرات الثلاثة على CD40 في LD مما يعني أنها بحاجة إلى تحليل معًا على الأقل في مجتمعنا. في هذا السياق ، وجدنا أن كتلة النمط الفرداني rs1883832 (C) -rs4810485 (T) -rs11086998 (C) مرتبطة بانخفاض خطر الإصابة بالـ ACS (OR: 0.22) وقد تكون عاملاً وقائيًا لـ ACS في غرب المكسيك السكان ، على الرغم من أنه لا يمكن استبعاد أن النيوكليوتيدات SNPs الأخرى المجاورة في كتلة LD ترتبط بقابلية المرض [21].

يعد تحليل التباين الجيني في الكروموسوم X في الأمراض أحد مجالات الاهتمام. تمشيا مع ما ورد أعلاه ، في CD40L، قمنا بتقييم اثنين من SNPs الموجودان في 5 UTR (rs3092952) و 3 UTR (rs3092920) ، وهما موجودان في كتل نمط فرداني مختلفة ولديهما LD ضعيف [36] كما أكدنا. تم وصف rs3092952 كمتغير وظيفي عن طريق تعديل مستويات sCD40L في عينات البلازما. بينما تمت دراسة rs3092920 كعلامة وراثية لأمراض القلب والأوعية الدموية في مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي واحتشاء عضلة القلب ، لم تجد بعض الدراسات مثل هذا الارتباط [15 ، 17] ، وهو ما يتوافق مع نتائجنا ، لأننا لم نجد ارتباطًا بين المتغيرات الجينية على ال CD40L الجين وخطر الإصابة بالـ ACS.

على الرغم من ذلك ، هناك عوامل أخرى قد تزيد من خطر الإصابة بالـ ACS وتؤثر على الأحداث الضائرة [5] لا تظهر نتائجنا دورًا مهمًا لهذه الأشكال المتعددة في أحداث الشريان التاجي الحادة. ومع ذلك ، يمكن التوسط في الآليات الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء تأثير هذه المتغيرات الجينية و ACS من خلال التغييرات في التعبير الجيني والبروتيني لـ CD40 و CD40L.

تم تحليل دراسات أخرى CD40/CD40L مستويات تعبير الرنا المرسال في مرض الشريان التاجي (CHD) ، بعد فصل الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي و qRT-PCR ، ووجدت زيادة كبيرة في مستويات التعبير لكلا الجينين في مجموعة أمراض الشرايين التاجية مقارنة بمجموعة التحكم [24].

لم نجد اختلافات بين CD40 مستويات mRNA في مجموع كريات الدم البيضاء في الدم المحيطي لمرضى ACS والأشخاص الضابطة. قد يكون هذا بسبب حقيقة أن المصدر الرئيسي لـ CD40 في الدم المحيطي هو الخلايا البائية [21]. فيلد وآخرون. لم يجد ارتباطًا بين النمط الجيني وتعبير CD40 mRNA المقاس في الدم الكامل ، ومع ذلك ، كان النمط الجيني C / C rs1883832 مرتبطًا بتعبير CD40 العالي في الخلايا البائية [21]. نقترح إجراء مزيد من الدراسات التي تحلل هذه المجموعات السكانية الفرعية لفهم وظائف هذه المتغيرات الجينية في التعبير الجيني CD40 mRNA.

يتفق عدم وجود ارتباط بين تعدد الأشكال الجينية وتعبير CD40 مع ذلك الذي أبلغ عنه Jacobson et al. [22] ، نظرًا لأنهم يقترحون أن المتغير الجيني rs1883832 ، والذي يعاني من اختلال توازن عالٍ مع rs4810485 (

) ، يعمل على مستوى الترجمة بدلاً من النسخ ، ويمارس آثاره باعتباره تعدد الأشكال الوظيفي في مسببات المرض من خلال تنظيم كفاءة الترجمة ، في غياب أي تأثير على النمط الجيني على مستويات الرنا المرسال. في نفس الخط ، ارتبط rs4810485 SNP بتعبير بروتين CD40 على خلايا CD14 + وحيدات وخلايا CD19 + B من مرضى الذئبة الحمامية التي تم تقييمها بواسطة قياس التدفق الخلوي [18]. أبلغت دراسات أخرى عن زيادة مستويات sCD40 في الأشخاص الذين يحملون الأليل الصغير لـ rs1883832 و rs4810485 تعدد الأشكال [25 ، 32].

لاحظنا زيادة مستويات sCD40 في عينات البلازما من مرضى الشريان التاجي الحاد مقارنة بمجموعة التحكم (). أثناء العمليات الالتهابية ، يتمتع sCD40 بخصائص بيولوجية توصف بأنها معدلة للمناعة ، لأنها تثبط الاستجابات المناعية [37]. تلعب الاستجابة النظامية المسببة للالتهاب دورًا رئيسيًا في الفيزيولوجيا المرضية لهذه المتلازمة التي تساهم في نتائج القلب والأوعية الدموية بهذا المعنى ، ويمثل sCD40 عنصرًا محتملاً يمكن من خلاله تعديل نظام CD40-CD40L من خلال تأثيره المضاد ضد تنشيط CD40 [38].

لم تختلف الكيانات السريرية لـ ACS في مستويات البلازما sCD40 () حتى عندما يكون لها نتائج مختلفة ، ويشارك sCD40 في عدة مراحل من تطوير ACS [39]. نسلط الضوء على أن نتائجنا يجب أن تؤخذ بحذر لأن عقار كلوبيدوجريل أوضح 25 ٪ من التباين الكلي لمستويات CD40 في البلازما في ACS وظهرت التركيزات المتزايدة للدهون في الدم كمؤشرات مهمة لمستويات sCD40 (يُشار إليها بالانحدار الخطي). ارتبط انخفاض تخليق الكوليسترول عن طريق العلاج الدوائي المستخدم في مرضى ACS بزيادة مستويات sCD40 [40]. من المهم توضيح أن عقار كلوبيدوجريل هو أحد الأدوية التي تشكل حجر الزاوية في خطة علاج هؤلاء المرضى ، لذلك يعد هذا متغيرًا متداخلاً يجب مراعاته في الدراسات المستقبلية. لسوء الحظ ، فإن عدد المرضى الذين لا يعالجون بالكلوبيدوجريل صغير جدًا مما يعيق المقارنات القوية.

يمكن أن يكون للعلاج الدوائي تأثير على مستويات البلازما لـ CD40 [41] ، وهو ظرف من شأنه أن يفسر عدم وجود ارتباط بين تعدد الأشكال على CD40 الموقع والمستويات القابلة للذوبان من عينات البلازما في مرضى ACS. الحجة المؤيدة لهذا هي النتائج في المجموعة الضابطة التي وجدنا أن ناقلات متماثلة اللواقح للأليل الرئيسي لـ rs1883832 و rs4810485 كان لها مستويات أعلى بكثير من sCD40 (الشكل 3).

المرضى الذين يعانون من ACS لديهم زيادة في مستوى CD40L مرنا مقارنة بالضوابط. الأهم من ذلك ، مستويات مرتفعة من CD40L يرتبط تعبير mRNA على الخلايا اللمفاوية التائية بأحداث الشريان التاجي الحادة [42]. على الرغم من أننا لم نجد فروقًا ذات دلالة إحصائية بين ACS و CG في مستويات البلازما sCD40L ، لاحظنا أن المرضى لديهم مستويات أعلى من sCD40L وعلاقة خطية إيجابية بين sCD40L و IFN-γ تم العثور على (الشكل 6) وبالتالي ، يمكن التكهن بأن مرضى الشريان التاجي الحاد قد عززوا استجابات الخلايا التائية التي تعزز الخلل البطاني والالتهاب الجهازي [43 ، 44].

خلص تقرير سابق إلى أن CD40L يمكن أن يتأثر تعبير mRNA بالجنس [20] بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يعكس انخفاض مستوى CD40L mRNA وزيادة تركيزات sCD40L نشاطًا أكبر للصفائح الدموية يدعم وظيفة CD40L في علم الأمراض المناعي للـ ACS [7]. وفقًا لذلك ، وجدنا فقط تركيز بلازما أعلى من sCD40L في مرضى ACS. من خلال الكيانات السريرية ، كان لدى الإناث المصابات بـ UA تركيز أقل من أولئك المصابات بـ STEMI ، لوحظ التأثير المعاكس في الذكور. تجدر الإشارة إلى أن الأطياف السريرية الثلاثة للـ ACS غالبًا ما يكون لها نفس الأعراض [45] ويتم حث المجتمع العلمي على إيجاد المؤشرات الحيوية التي تكمل التشخيص.

علاوة على ذلك ، فقد تم الإبلاغ عن أن 4٪ إلى 30٪ من المرضى الذين يعانون من أمراض نقص تروية القلب والأوعية الدموية لديهم استجابة ضعيفة للعلاج بمضادات الصفيحات المسمى بـ "المستجيبين المنخفضين" أو "غير المستجيبين" [46] على وجه التحديد ، تم الإبلاغ عن أن المرضى الذكور كانوا أكثر احتمالًا بمقدار 2.9 مرة. أن يكونوا غير مستجيبين للعلاج بمضادات الصفيحات أكثر من الإناث [47] وقد تم ربطهم بحدث قلبي وعائي متكرر مثل الوفاة بسبب أمراض القلب التاجية ، أو حدث تاجي رئيسي غير مميت (احتشاء عضلة القلب ، الاستشفاء بسبب الذبحة الصدرية غير المستقرة ، أو السكتة القلبية المنشطة) ، أو النقص الإقفاري القاتل السكتة الدماغية [48].

أثار استمرار تفاعل الصفائح الدموية حتى مع استخدام العوامل المضادة للصفيحات اهتمامًا بالاستراتيجيات القادرة على تحديد الأشخاص المعرضين لخطر الإصابة بأحداث القلب والأوعية الدموية المتكررة بعد الإصابة بالـ ACS. في هذا الصدد ، ارتبط تركيز CD40L في البلازما كعلامة على تلف عضلة القلب ويتنبأ بشكل مستقل بالوفاة وتكرار MI في مرضى ACS [10]. وبالتالي ، فإن تعديل العلاج المضاد للصفيحات المستخدم في ACS وفقًا للجنس وعوامل الخطر يمكن أن يقلل من مخاطر الأحداث الضائرة ويحسن نتائج المرضى.

ومع ذلك ، فإننا نضع في اعتبارنا أنه ينبغي تفسير نتائجنا بحذر وتكرارها بسبب تأثير حجم العينة في ظل التحليل الطبقي.

أخيرًا ، لا يرتبط تحليل الارتباط بين المتغيرين الجينيين لـ CD40L بتعبير mRNA وتركيز البروتين. هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات للنظر في العوامل القابلة للتعديل التي يمكن أن تغير التعبير الجيني لفهم التأثير الوظيفي لهذه الأشكال المتعددة في تعبير CD40 و CD40L.

5. الاستنتاجات

تم تحليل المتغيرات الجينية لـ CD40 و CD40L ليست علامات حساسية للـ ACS في هذه المجموعة المكسيكية. ومع ذلك ، ارتبط النمط الفرداني CTC لـ CD40 بانخفاض خطر الإصابة بالـ ACS.

أظهر مرضى ACS أعلى CD40L التعبير النسبي مرنا من الضوابط.

كانت المستويات القابلة للذوبان من CD40 مرتفعة في مرضى ACS ومع ذلك ، فإنهم يتأثرون بعلاج كلوبيدوجريل.

في عناصر التحكم ، أظهرت ناقلات النمط الجيني rs1883232 C / C و rs4810485 G / G مستويات أعلى للذوبان من CD40.

كان لدى المرضى الإناث المصابات بمرض STEMI مستويات أعلى من sCD40L مقارنة مع UA. بخلاف ذلك ، قدم المرضى الذكور UA مستويات أعلى من sCD40L مقارنة مع UA. لم يكن للأدوية تأثير كبير على البلازما sCD40L.

يمكن أن تعكس هذه النتائج العملية الالتهابية وتنشيط الصفائح الدموية لدى مرضى ACS ، حتى عندما يكونون تحت العلاج المضاد للصفيحات والالتهابات. نظرًا للأدوار المهمة لنظام CD40-CD40L في العمليات المناعية في التسبب في متلازمة ACS ، يلزم إجراء دراسات طولية لتحديد ما إذا كانت المستويات القابلة للذوبان من CD40 و CD40L يمكن أن تكون علامات مفيدة سريريًا لحدث قلبي وعائي متكرر بعد ACS.

توافر البيانات

تم تضمين البيانات المستخدمة لدعم نتائج هذه الدراسة في المقالة.

تضارب المصالح

يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بنشر هذه المقالة.

شكر وتقدير

يقدر المؤلفون بشكل كبير مشاركة كل شخص في هذه الدراسة. تم دعم هذا العمل جزئيًا من قبل PROSNI 2017 و PROSNI 2018 الممنوحة لـ YV من قبل جامعة غوادالاخارا.

مراجع

  1. أ. جيستيرا وج. ك. هانسون ، "علم المناعة لتصلب الشرايين ،" مراجعات الطبيعة أمراض الكلى، المجلد. 13 ، لا. 6 ، ص 368-380 ، 2017 ، النشر المسبق عبر الإنترنت. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  2. جي إل أندرسون ودي إيه مورو ، "احتشاء عضلة القلب الحاد ،" نيو انغلاند جورنال اوف ميديسين، المجلد. 376 ، لا. 21، pp.2053–2064، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  3. R. S. Rosenson ، و H.B Brewer ، و D.J Rader ، "البروتينات الدهنية كمؤشرات حيوية وأهداف علاجية في تحديد متلازمة الشريان التاجي الحادة ،" بحوث الدورة الدموية، المجلد. 114 ، لا. 12 ، ص 1880-1889 ، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  4. M. K. Reriani ، A. J. Flammer ، A. Jama ، L. O. Lerman ، and A. Lerman ، "عوامل الخطر الوظيفية الجديدة للتنبؤ بأحداث القلب والأوعية الدموية في المرضى المعرضين للخطر بعد متلازمة الشريان التاجي الحادة ،" مجلة الإعارة، المجلد. 76 ، لا. 4، pp.778–783، 2012. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  5. إم فرانشيني ، "علم الوراثة لمتلازمة الشريان التاجي الحادة ،" حوليات الطب متعدية، المجلد. 4 ، لا. 10 ، ص. 192، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  6. R. Elosua و C. Lluis و G. Lucas ، "Estudio del componente genético de la cardiopatía isquémica: de los estudios de ligamiento al genotipado Integrated del genoma،" Revista Española de Cardiología Suplementos، المجلد. 9 ، لا. 2، pp.24–38، 2009. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  7. ميشيل ، أ. زيرليك ، ودي وولف ، "CD40L ومستقبلاته في تجلط الشرايين - تحديث" الحدود في طب القلب والأوعية الدموية، المجلد. 4 ، ص. 40 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  8. E. Lutgens ، و D.Levens ، و L. Beckers ، و M. Donners ، و M. Daemen ، "CD40 ورابطته في تصلب الشرايين ،" الاتجاهات في طب القلب والأوعية الدموية، المجلد. 17 ، لا. 4، pp. 118–123، 2007. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  9. سي أنطونيادس ، سي باكوجيانيس ، دي.توسوليس ، إيه إس أنتونوبولوس ، وسي ستيفاناديس ، "نظام الترابط CD40 / CD40: ربط الالتهاب بتجلط الشرايين ،" مجلة الكلية الأمريكية لأمراض القلب، المجلد. 54 ، لا. 8، pp.669–677، 2009. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  10. N. Varo ، J. A. de Lemos ، P. Libby et al. ، "Soluble CD40L: توقع المخاطر بعد متلازمات الشريان التاجي الحادة ،" الدوران، المجلد. 108 ، لا. 9 ، ص 1049-1052 ، 2003. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  11. M.Rondina، J.M Lappé، J.F Carlquist et al.، "Soluble CD40 ligand باعتباره مؤشرًا لمرض الشريان التاجي والنتائج السريرية طويلة المدى في المرضى المستقرين الذين يخضعون لتصوير الأوعية التاجية ،" طب القلب، المجلد. 109 ، لا. 3، pp. 196–201، 2008. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  12. Y. Li، C.-X. تيان ، إم وانج ، و Z.-E. شيا ، "ارتباط تعدد الأشكال الجينية CD40 بمتلازمة الشريان التاجي الحادة وارتفاع ضغط الدم والسكري ،" Zhonghua Yi Xue Za Zhi، المجلد. 87 ، لا. 10، pp.690–694، 2007. View at: Google Scholar
  13. C. Tian و W. Qin و L. Li و W. Zheng و F. Qiu ، "يرتبط تعدد الأشكال الشائع في تسلسل CD40 Kozak (-1C / T) بمتلازمة الشريان التاجي الحادة ،" الطب الحيوي والعلاج الدوائي، المجلد. 64 ، لا. 3، pp.191–194، 2010. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  14. سي وانج ، وجي يان ، وبي يانج ، ور. دو ، وج. تشين ، "العلاقة بين تعدد الأشكال الجيني CD40 ولويحات تصلب الشرايين التاجية غير المستقرة ،" أمراض القلب السريرية، المجلد. 33 ، لا. 6 ، الصفحات من E55 إلى E60 ، 2010. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  15. A.Mälarstig ، B. Lindahl ، L. Wallentin ، و A. Siegbahn ، "يتم تنظيم مستويات CD40L القابلة للذوبان بواسطة تعدد الأشكال -3459 A & gtG والتنبؤ باحتشاء عضلة القلب وفعالية العلاج المضاد للتخثر في متلازمة الشريان التاجي الحادة غير المرتفعة ST ،" تصلب الشرايين والجلطة، وعلم الأحياء الأوعية الدموية، المجلد. 26 ، لا. 7، pp.1667–1673، 2006. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  16. K.P Burdon ، C.D Langefeld ، S.R Beck et al. ، "ترتبط متغيرات جين CD40 وليس جين CD40L بتكلس الشريان التاجي في دراسة القلب لمرض السكري (DHS) ،" مجلة القلب الأمريكية، المجلد. 151 ، لا. 3 ، الصفحات 706-711 ، 2006. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  17. M. García-Bermúdez، C. González-Juanatey، R.López-Mejías et al. ، "دراسة ارتباط تعدد الأشكال الجينية CD40-CD154 مع القابلية للإصابة بالأمراض وخطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية لدى مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي الإسباني ،" بلوس واحد، المجلد. 7 ، لا. 11 ، ص. e49214، 2012. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  18. V. M. Vazgiourakis، M. I. Zervou، C. Choulaki et al. ، "يرتبط SNP الشائع في منطقة CD40 بالذئبة الحمامية الجهازية ويرتبط بتعبير CD40 المتغير: الآثار المترتبة على التسبب في المرض ،" حوليات الأمراض الروماتيزمية، المجلد. 70 ، لا. 12، pp. 2184–2190، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  19. K. S. Gandhi ، F. C. McKay ، M. Cox et al. ، "تشير الترابطات الوراثية والترابطات الوراثية للتصلب المتعدد إلى خلل في تنظيم مسارات الخلايا التائية المحددة في التسبب في المرض ،" علم الوراثة الجزيئية البشرية، المجلد. 19 ، لا. 11 ، ص 2134-2143 ، 2010. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  20. M. Wagner ، M. Sobczyński ، M. Bilińska et al. ، "يرتبط MS المخاطرة allele rs1883832T بانخفاض تعبير mRNA لـ CD40 ،" مجلة علم الأعصاب الجزيئي، المجلد. 56 ، لا. 3، pp.540–545، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  21. J. Field ، F. Shahijanian ، S. Schibeci et al. ، "يرتبط أليل خطر MS لـ CD40 بتعبير مرتبط بغشاء الخلية في خلايا تقديم المستضد: الآثار المترتبة على وظيفة الجين ،" بلوس واحد، المجلد. 10 ، لا. 6 ، ص. e0127080، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  22. إي إم جاكوبسون وإي كونسبسيون وتي أواشي وإي.تومر ، "إن تعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات المرتبط بمرض جريفز يعزز كفاءة ترجمة جين CD40: حالة من الفيزيولوجيا المرضية الترجمية ،" طب الغدد الصماء، المجلد. 146 ، لا. 6 ، ص 2684-2691 ، 2005. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  23. Z.-L. ليو ، جيه هو ، S.-P. تشاو ، X.-Z. شياو ، و M.-S. يانغ ، "إن CD40 rs1883832 تعدد الأشكال يؤثر على حساسية الإنتان ومستويات sCD40L ، " بيوميد الدولية للبحوث، المجلد. 2018 ، معرف المقال 7497314 ، 8 صفحات ، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  24. تشن ، ج. لي ، S.-J. تشاو ، د. وانغ ، دبليو- زي. تشانغ ، و W.-J. ليانغ ، "الأهمية السريرية لجزيئات تكلفة التكلفة CD40 / CD40L و CD134 / CD134L في أمراض القلب التاجية ،" طب، المجلد. 96 ، لا. 32 ، مقالة e7634 ، 2017. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  25. I. V. Román-Fernández، D.Fela-Castillo، S. Cerpa-Cruz et al.، “CD40 الوظيفية تعدد الأشكال الجينية وتعبير الرنا المرسال في مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي من غرب المكسيك ،” علم الوراثة والبحوث الجزيئية، المجلد. 15 ، لا. 4 ، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  26. P. Gururajan ، P. Gurumurthy ، P. Nayar et al. ، "زيادة تركيزات المصل من مركب CD40 القابل للذوبان كعلامة تنبؤية في المرضى الذين يعانون من متلازمة الشريان التاجي الحادة ،" المجلة الهندية للكيمياء الحيوية السريرية، المجلد. 24 ، لا. 3، pp. 229–233، 2009. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  27. D. Engel ، T. Seijkens ، M. Poggi et al. ، "علم الأحياء المناعي لتفاعلات CD154-CD40-TRAF في تصلب الشرايين ،" ندوات في علم المناعة، المجلد. 21 ، لا. 5، pp.308–312، 2009. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  28. CP Cannon، RG Brindis، BR Chaitman et al.، "2013 ACCF / AHA عناصر البيانات الرئيسية وتعريفات لقياس الإدارة السريرية ونتائج المرضى الذين يعانون من متلازمات الشريان التاجي الحادة ومرض الشريان التاجي: تقرير من الكلية الأمريكية لأمراض القلب / فرقة العمل التابعة لجمعية القلب الأمريكية بشأن معايير البيانات السريرية (لجنة الكتابة لتطوير متلازمات الشريان التاجي الحادة ومعايير البيانات السريرية لمرض الشريان التاجي) ، " الدوران، المجلد. 127 ، لا. 9، pp.1052–1089، 2013. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  29. P. Chomczynski و N. Sacchi ، "الطريقة أحادية الخطوة لعزل الحمض النووي الريبي عن طريق استخراج حمض الغوانيدينيوم ثيوسيانات-فينول-كلوروفورم: عشرين عامًا بعد ذلك ،" بروتوكولات الطبيعة، المجلد. 1 ، لا. 2 ، ص 581-585 ، 2006. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  30. ليفاك و تي دي شميتجن ، "تحليل بيانات التعبير الجيني النسبي باستخدام PCR الكمي في الوقت الفعلي وطريقة 2 (دلتا دلتا C (T)) ،" طرق سان دييغو ، كاليفورنيا، المجلد. 25 ، لا. 4 ، ص 402-408 ، 2001. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  31. M. Wang و Y. Li و W. Li و Z. Xia و Q. Wu ، "يرتبط تعدد الأشكال الجيني CD40 rs1883832 بخطر الإصابة بمتلازمة الشريان التاجي الحادة في دراسة الحالات والشواهد الصينية ،" بيولوجيا الخلية والحمض النووي، المجلد. 30 ، لا. 3، pp. 173–178، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  32. J.-M. Chen ، J. Guo ، C.D Wei et al. ، "ارتباط تعدد الأشكال CD40 بمستويات مصل CD40 وخطر الإصابة بالذئبة الحمامية الجهازية ،" علم الوراثة BMC، المجلد. 16 ، لا. 1 ، 2015. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  33. H.- ج. كو ، إم سي تشاو ، واي دبليو هسو وآخرون ، "تعدد الأشكال الجينية CD40 المرتبطة بالحساسية وآفات الشريان التاجي لمرض كاواساكي في سكان تايوان ،" مجلة العالم العلمي، المجلد. 2012 ، معرف المقالة 520865 ، 5 صفحات ، 2012. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  34. A.L Peters ، R.M Plenge ، R.R Graham et al. ، "تعدد أشكال جديد لمستقبل CD40 البشري مع وظيفة محسّنة ،" دم، المجلد. 112 ، لا. 5، pp. 1863–1871، 2008. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  35. روبي-كاستيلانوس ، ج. مارتينيز-كورتيس ، ج.فرانسيسكو مونيوز-فالي وآخرون ، "ديموغرافيا أمريكا الوسطى ما قبل الأسبانية تقترب من السلالة الحالية للميستيزو في جميع أنحاء أراضي المكسيك ،" المجلة الأمريكية للأنثروبولوجيا الفيزيائية، المجلد. 139 ، لا. 3، pp.284–294، 2009. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  36. S. Chadha ، K. Miller ، L. Farwell et al. ، "بنية النمط الفرداني لـ TNFRSF5-TNFSF5 (CD40-CD40L) وتحليل الارتباط في الذئبة الحمامية الجهازية ،" المجلة الأوروبية لعلم الوراثة البشرية، المجلد. 13 ، لا. 5، pp.669–676، 2005. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  37. C. van Kooten and J. Banchereau، “CD40-CD40 ligand،” مجلة بيولوجيا الكريات البيض، المجلد. 67 ، لا. 1، pp.2–17، 2000. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  38. B. D. هوك ، J.L McKenzie ، N.W Patton et al. ، "المستويات المتداولة والأهمية السريرية لـ CD40 القابل للذوبان في المرضى المصابين بأورام الدم الخبيثة ،" سرطان، المجلد. 106 ، لا. 10، pp. 2148–2157، 2006. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  39. M. Tsuzuki ، I. Morishima ، T. Yoshida et al. ، "الارتباط العكسي بين ليجند CD40 القابل للذوبان و CD40 القابل للذوبان غائب في المرضى الذين يعانون من الذبحة الصدرية غير المستقرة ،" أوعية القلب، المجلد. 20 ، لا. 6 ، الصفحات من 245 إلى 250 ، 2005. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  40. M. Luomala و H. Päivä و R. Laaksonen et al. ، "يرتبط CD40 القابل للذوبان في البلازما باستقلاب الكوليسترول في المرضى الذين يعانون من فرط كوليسترول الدم المعتدل ،" مجلة القلب والأوعية الدموية الاسكندنافية، المجلد. 40 ، لا. 5، pp.280–284، 2006. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  41. T. Sexton و E. Wallace و S. Smyth ، "التأثيرات المضادة للتخثر للعقاقير المخفضة للكوليسترول في متلازمات الشريان التاجي الحادة: عند تقاطع تفاعلات الجلطة والالتهاب وتفاعلات الصفائح الدموية مع الكريات البيض ،" مراجعات أمراض القلب الحالية، المجلد. 12 ، لا. 4، pp.324–329، 2016. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  42. S. X. Anand ، J. F. Viles-Gonzalez ، J. J. Badimon ، E. Cavusoglu ، and J.D Marmur ، "Membrane-related CD40L and sCD40L in atherothrombotic disease" التخثر والتخثر، المجلد. 90 ، لا. 09 ، ص 377-384 ، 2003. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  43. J.F McDyer، T. J.Goletz، E. Thomas، C.H June، and R.A Seder، “CD40 ligand / CD40 stimulation تنظم إنتاج IFN-γ من الخلايا أحادية النواة في الدم البشري المحيطي بطريقة تعتمد على IL-12 و / أو CD28 ، " مجلة علم المناعة، المجلد. 160 ، لا. 4، pp.1701–1707، 1998. View at: Google Scholar
  44. K. Y. Stokes و L. Calahan و C.M Hamric و J.M Russell و D.N Granger ، "يساهم CD40 / CD40L في التهاب الأوعية الدموية الدقيقة الناجم عن فرط كوليسترول الدم ،" المجلة الأمريكية لعلم وظائف الأعضاء - القلب وعلم وظائف الأعضاء الدموية، المجلد. 296 ، لا. 3، pp. H689-H697، 2009. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  45. حساسية عالية لتروبونين القلب من أجل التشخيص السريع لمتلازمة الشريان التاجي الحادة في قسم الطوارئ: تقييم سريري وفعال من حيث التكلفة، الوكالة الكندية للأدوية والتقنيات في الصحة ، أوتاوا ، 2013 ، تقرير الاستخدام الأمثل CADTH ، رقم 2.1A.
  46. T.K W. Ma ، Y.-Y. لام ، في.ب. تان ، وب.ب.يان ، "التباين في الاستجابة للكلوبيدوجريل: ما مدى أهمية علم الوراثة الدوائية والتفاعلات الدوائية؟" Br. J. كلين. فارماكول.، المجلد. 72 ، لا. 4، pp.697–706، 2011. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  47. روتش ، إس سي سي كانيجيتر ، و دبليو إم ليجيرنج ، "المخاطر التفاضلية عند الرجال والنساء للتخثر الوريدي الأول والمتكرر: دور الجينات والبيئة ،" مجلة التخثر والتخثر، المجلد. 12 ، لا. 10، pp.193–1600، 2014. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل
  48. G.G Schwartz ، C.M Ballantyne ، P. J. Barter et al. ، "رابطة البروتين الدهني (أ) مع خطر الأحداث الإقفارية المتكررة بعد متلازمة الشريان التاجي الحادة: تحليل نتائج dal-Outcomes السريرية العشوائية ،" جاما القلب، المجلد. 3 ، لا. 2، pp. 164–168، 2018. عرض على: موقع الناشر | منحة جوجل

حقوق النشر

حقوق النشر & # x00A9 2019 D. E. Mart & # x00EDnez-Fern & # x00E1ndez et al. هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب ترخيص Creative Commons Attribution License ، والذي يسمح بالاستخدام غير المقيد والتوزيع والاستنساخ في أي وسيط ، بشرط الاستشهاد بالعمل الأصلي بشكل صحيح.


أساليب

مشاركون

كان المشاركون 105 من الذكور القوقازيين الذين تتراوح أعمارهم بين 18 و 77 عامًا (م = 28.51 ، SD = 13.82) الذين تم تجنيدهم من جامعة ستوني بروك والمجتمعات المحيطة من خلال النشرات والصحف والإعلانات عبر الإنترنت. تم فحص المشاركين عبر الهاتف للأهلية. أبلغ جميع المشاركين عن عدم وجود تشخيص مسبق للاضطرابات النفسية أو استخدام أي دواء ذي صلة. ترد تفاصيل معايير الاستبعاد الأخرى في ملف إضافي 1. كانت مقاييس الحياة المبكرة والتوتر المزمن ، والنمط الجيني 5-HTTLPR ، ومثيل الحمض النووي (انظر أدناه) متاحة من جميع هؤلاء المشاركين. مجموعة فرعية (ن = 71) شارك في TSST (م سن = 29.79، SDسن = 15.24). كانت بيانات إضافية عن أعراض الاكتئاب الأخيرة ، والتعبير الجيني ، واستجابة الكورتيزول ل TSST متاحة من هؤلاء المشاركين. تمت الموافقة على الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية بجامعة ستوني بروك ، وقدم المشاركون موافقات مكتوبة قبل المشاركة في الجلسات التجريبية. في نهاية كل جلسة ، تم استجواب المشاركين شفهيًا وخطيًا وتم تعويضهم بمبلغ 100 دولار بالإضافة إلى سداد أي تكاليف نقل عام.

الجلسات التجريبية

لتوحيد المقاييس البيولوجية تحت تأثير التباين النهاري ، بدأت جميع الجلسات التجريبية بين الساعة 12:00 والساعة 14:00. تم توجيه المشاركين بالامتناع عن الأكل والشرب (بخلاف الماء) وممارسة الرياضة لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل وصولهم. تضمن الإجراء الإجمالي ، الذي استغرق حوالي 4 ساعات ، الموافقة ، واستكمال الاستبيانات ، و TSST ، ومقابلة حدث مدى الحياة ، واستخلاص المعلومات. قدم المشاركون أيضًا عينات دم للتنميط الجيني وتحليل مثيلة الحمض النووي ، واحدة في بداية الجلسة (45 دقيقة قبل TSST) والأخرى في النهاية (105 دقيقة بعد TSST). تم تقييم مستويات الكورتيزول باستخدام عينات اللعاب التي تم جمعها في تسع نقاط زمنية مختلفة طوال الجلسة.

تقييم ضغوط الحياة المبكرة

تم تقييم ضغوط الحياة المبكرة باستخدام استبيان صدمات الطفولة (CTQ) [47] ، وهو مقياس شائع الاستخدام لسوء معاملة الأطفال يتكون من 28 عنصرًا مع مستويات فرعية من الإساءة الجسدية والجنسية والعاطفية والإهمال الجسدي والعاطفي. يتكون كل مقياس فرعي من خمسة عناصر ، بالإضافة إلى ثلاثة عناصر تعمل على التحكم في إنكار سوء المعاملة. تم تصنيف العناصر على مقياس ليكرت المكون من 5 نقاط (من 1 إلى 5) ، حيث تشير الدرجات الأعلى إلى مستويات أعلى من سوء المعاملة. يتم إضافة الدرجات لحساب مجموع نقاط CTQ ، والتي يمكن أن تتراوح من 25 إلى 125.

تقييم الإجهاد المزمن وأعراض الاكتئاب الحديثة

تم تقييم الإجهاد المزمن للأشهر الثلاثة الماضية من خلال جرد ترير للإجهاد المزمن (TICS) [48 ، 49]. TICS عبارة عن مقياس تقرير ذاتي مكون من 12 عنصرًا حول تكرار السلوكيات المتعلقة بالإجهاد المزمن ، مثل "أشعر بالقلق من عدم تمكني من الوفاء بمهامي" و "تجربة وجود الكثير لأقوم به". مصنفة من 0 (أبدًا) إلى 4 (غالبًا) ، ويتم إضافة العناصر لحساب إجمالي درجة الإجهاد المزمن ، والتي يمكن أن تتراوح من 0 إلى 48.

أكمل المشاركون الذين أجروا اختبار TSST أيضًا Beck Depression Inventory II BDI-II [50] لتقييم أعراض الاكتئاب الأخيرة. BDI-II هو مقياس تقرير ذاتي مكون من 21 عنصرًا لأعراض الاكتئاب الأخيرة (الأسبوعين الماضيين) مثل الحزن واليأس ولوم الذات. يتم تصنيف كل عنصر على مقياس من 0 إلى 3 ، ويمكن أن تتراوح الدرجات من 0 إلى 63. تشير الدرجات الأعلى إلى أعراض اكتئاب أعلى.

تقييم مستويات الكورتيزول والتفاعل مع الإجهاد

لتقييم مستويات الكورتيزول استجابةً لـ TSST ، تم جمع عينات لعاب المشاركين باستخدام اللعاب (Sarstedt ، Rommelsdorf ، ألمانيا). بعد خمسة وأربعين دقيقة من سحب الدم الأول وقبل بداية اختبار TSST بقليل ، قدم المشاركون عينات أساسية من اللعاب ثم تم نقلهم إلى غرفة TSST. تم إجراء TSST كما هو موضح في Kirschbaum وآخرون. [22]. باختصار ، تألفت المهمة من مرحلة إعداد (5 دقائق) ، أعقبها خطاب عام (5 دقائق) حول سبب كون المشارك هو أفضل مرشح لوظيفة أحلامه ومهمة العد العكسي (5 دقائق) . جرت المهمة أمام لجنة مؤلفة من شخصين لم تقدم أي ملاحظات شفهية أو غير لفظية. كان عضو اللجنة النشط ، الذي أعطى تعليمات للموضوع أثناء TSST ، دائمًا من الجنس الآخر (أنثى) ، وكان عضو اللجنة غير النشط ، الذي لم يتواصل مع المشارك ، دائمًا من نفس جنس المشارك (ذكر). بعد TSST ، عاد المشاركون إلى غرفة الاختبار الأولية وقدموا عينة ثانية من اللعاب مباشرة بعد TSST وملأوا مقياسًا تناظريًا مرئيًا (VAS) مكونًا من 8 عناصر لتقييم تجربتهم مع TSST ، مثل العثور عليها مرهقة ومهددة ، أو تحدي. تم جمع عينات لعاب إضافية في 10 و 20 و 30 و 45 و 60 و 90 و 105 دقيقة بعد TSST. تم تخزين عينات اللعاب عند درجة حرارة -20 درجة مئوية مباشرة بعد الجلسة حتى يتم شحنها إلى جامعة برانديز ، بوسطن ، لتحليل تركيز الكورتيزول. تم اختبار كل عينة في نسخ مكررة باستخدام مقايسة مناعية للتلألؤ الكيميائي متوفرة تجارياً (RE62019) بحساسية تبلغ 0.16 نانوغرام / مل (IBL International ، تورونتو ، أونتاريو ، كندا). كانت معاملات التباين بين وداخل المقايسة أقل من 7٪ و 4٪ على التوالي. تم تقييم زيادة ذروة الكورتيزول على أنها الفرق بين مستوى ذروة الكورتيزول بعد TSST وخط الأساس كما هو مستخدم في الدراسات السابقة [23 ، 24]. بالنسبة لجميع المشاركين ، لوحظ أعلى استجابة بعد TSST في غضون 10 إلى 20 دقيقة بعد TSST. استخدمنا استجابة الذروة ، بدلاً من المنطقة الواقعة تحت المنحنى ، كمقياس لتفاعل الكورتيزول ، لأن الأول من المحتمل أن يكون أكثر ارتباطًا بالتغيرات في التعبير الجيني بينما الأخير قد يكون أكثر ارتباطًا بالإنتاج الهرموني الكلي [51].

تجهيز عينات الدم

من أجل البدء بمجموعة موحدة من الخلايا ، تم عزل الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي (PBMCs) من الدم مباشرة بعد سحب الدم ، باستخدام أنابيب Leucosep® (Greiner Bio-One Inc. ، Monroe ، NC ، الولايات المتحدة الأمريكية) و Ficoll-Paque (GE Healthcare، Pittsburgh، PA، USA) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة. تم تخزين كريات PBMC المعزولة عند درجة حرارة -80 درجة مئوية لإجراءات استخراج الحمض النووي والحمض النووي الريبي اللاحقة.

تم إجراء عمليات استخراج الحمض النووي والحمض النووي الريبي من كريات PBMC بواسطة مجموعة AllPrep DNA / RNA / Protein Mini (Qiagen ، فالنسيا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم تقييم كمية ونوعية الحمض النووي والحمض النووي الريبي من خلال NanoDrop ND-1000 (Thermo Scientific ، Wilmington ، DE ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، تم تخزين عينات الحمض النووي عند درجة حرارة -20 درجة مئوية ، وتم تخزين عينات الحمض النووي الريبي عند درجة حرارة -80 درجة مئوية.

التنميط الجيني لـ 5-HTTLPR و rs25531

تم تحديد التركيب الجيني 5-HTTLPR من خلال تضخيم PCR لـ 25 نانوغرام من الحمض النووي عند درجة حرارة التلدين 67.5 درجة مئوية باستخدام البادئات المستخدمة في العمل السابق [5]. تمت معالجة مجموعة فرعية عشوائية من 24 عينة مرتين بواسطة فني أعمى عن النتائج الأولية لإثبات موثوقية الاختبار-إعادة الاختبار ، والتي كانت 100٪. نتيجة للتنميط الجيني ، تم التنميط الجيني للأفراد كـ S / S أو S / L أو L / L.

من أجل التنميط الجيني لـ A / G SNP (rs25531) ، تم هضم 6 ميكرولتر من منتجات 5-HTTLPR PCR باستخدام 5 وحدات من هباإنزيم التقييد الثاني (نيو إنجلاند بيولابس ، إبسويتش ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 3 ساعات عند 37 درجة مئوية. نتيجة لذلك ، تم تصنيف الأفراد وراثيًا على أنهم S / S ، S / Lأ، S / Lجي، لامأ/ لأ، لامأ/ لجي، و أناجي/ لجي. بالنظر إلى هذا التعبير عن L.جي تم اقتراح أن يكون الأليل مشابهًا للأليل S [52] ، وهو الأليل التجريبي (S ، Lأ، لامجي) مخطط تصنيف مجمعة S / L.جي و أناجي/ لجي الأفراد كـ "S / S" و Lأ/ لجي الأفراد كـ "L / S". كانت توزيعات النمط الوراثي في ​​توازن هاردي-واينبرغ وفقًا لخطط تصنيف بياليليك وتجريبي (ص & GT .05).

تحليلات مثيلة الحمض النووي

لتحليل مثيلة الحمض النووي ، تمت معالجة 500 نانوغرام من الحمض النووي من كل مشارك في الأساس بيسلفيت باستخدام مجموعة Epitect Bisulfite (Qiagen ، CA) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة وتخزينها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية حتى استخدامها في تحليلات المثيلة. بالإضافة إلى ذلك ، في جميع تحليلات المثيلة ، تم معالجة 500 نانوغرام غير ميثيل (0٪) وعينات الحمض النووي البشري الميثيل بالكامل (100٪) (Zymo Research ، Irvine ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) مع عينات المشاركين لاستخدامها كتحويل بيسلفيت ضوابط.

مثيلة الحمض النووي العالمية

مثيلة العنصر النووي 1 المتناثر الطويل (خط 1) كمقياس للمثيلة العالمية لكل من التحقيق في الارتباطات مع ELS (على غرار [39]) وللتحكم في المثيلة العالمية عند التحقيق في مثيلة محددة الجين (على غرار [31]). خط 1 تم قياس كمية المثيلة في نسخ مكررة باستخدام مجموعة PyroMark Q96 CpG LINE-1 (Qiagen ، CA) في نظام PyroMark Q96 MD في مرفق الجينوميات الأساسي بجامعة ستوني بروك وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة ومع البادئات التجارية المقدمة مع المجموعة. ترد تفاصيل الإجراء في ملف إضافي 1.

SLC6A4 مثيلة الحمض النووي لجزيرة CpG

مثيلة جزيرة CpG المنبع من SLC6A4 تم قياس كمية بواسطة نظام Sequenom Epityper MassArray (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تصميم مجموعتين من البادئات لتضخيم مواقع CpG البالغ عددها 79 موقعًا في جزيرة CpG في أمبليكونين مشابهين لـ Philibert وآخرون. [40] باستخدام برنامج Epityper (Sequenom، CA). مع هذه التقنية ، مثيلة وحدات CpG يتم تحليلها ، والتي يمكن أن تتكون من موقع واحد أو أكثر من مواقع CpG المجاورة. تمت تغطية إجمالي 37 وحدة CpG بواسطة الأمبليكون ، المكونين من 79 موقعًا من مواقع CpG. تم تشغيل جميع العينات في ثلاث نسخ. بعد المعالجة المسبقة ، تم تضمين بيانات الميثيل من 26 وحدة CpG في الأمبليكون 1 و 2 في جميع التحليلات (الشكل 1). ترد تفاصيل الإجراء وتسلسل التمهيدي وتحليل البيانات في ملف إضافي 1.

SLC6A4 أمبليكون جزيرة CpG لتحليل مثيلة الحمض النووي. وحدات CpG التي تم تحليلها مرقمة من 1 إلى 26. يمتد exon غير المترجم وحدات CpG من 12 إلى 15 و 5-HTTLPR يقع في أعلى منبع جزيرة CpG. تُظهر العلامات النجمية وحدات CpG التي تنتمي إلى العوامل 1 و 2 و 3 (F1 إلى F3). تراوحت تحميلات عامل F1 من .35 إلى .83 ، وتراوحت تحميلات عامل F2 من .37 إلى .76 ، وتراوحت تحميلات عامل F3 من .73 إلى .87.

تحليلات التعبير الجيني

لكل مشارك ، تم استخدام عينتين من الحمض النووي الريبي لتحليل التعبير الجيني ، واحدة قبل 45 دقيقة من TSST (خط الأساس) ، و 105 دقيقة أخرى بعد TSST (الاستجابة). قبل القياس الكمي للتعبير الجيني ، تم تقييم سلامة عينات الحمض النووي الريبي باستخدام Agilent 2100 BioAnalyzer (Agilent Technologies ، سانتا كلارا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). كانت أرقام سلامة الحمض النووي الريبي (RINs) للعينات عالية (م = 7.94 ، SD = 1.32) ، ولم تختلف أرقام RIN للعينات قبل وبعد TSST بشكل كبير (ص = .853). بعد ذلك ، تم تحويل 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي من كل نقطة زمنية إلى (كدنا) باستخدام مجموعة النسخ العكسي QuantiTect وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (Qiagen ، CA). تم بعد ذلك تخفيف عينات (كدنا) خمس مرات ، واستخدم 1 ميكرولتر من (كدنا) المخفف لتحليل التعبير الجيني للجينات المرشحة بواسطة PCR الكمي (qPCR) ، باستخدام مجموعة Qiagen SYBR Green PCR + UNG (Qiagen ، CA) والجين - مواد أولية محددة مصممة من موقع مكتبة Roche Universal Probe (http://www.roche-applied-science.com/sis/rtpcr/upl/ezhome.html). تم إجراء تفاعلات qPCR في ثلاث نسخ في نظام Roche 480 LightCycler (Roche Applied Science ، إنديانابوليس ، إنديانا ، الولايات المتحدة الأمريكية) عند درجة حرارة تلدين تبلغ 60 درجة مئوية.

لتحديد أفضل الجينات المرجعية في PBMCs ، تم تحليل التعبير عن ستة جينات مرجعية مرشحة من عينات RNA لخمسة أفراد ، تم الحصول عليها في نقاط الأساس ووقت الاستجابة. تم تحديد هذه الطريقة HPRT1 (Hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1) و جابده (نازعة هيدروجين الغليسرالديهيد 3-فوسفات) كأفضل الجينات المرجعية في PBMCs. جتي تم بعد ذلك استخدام القيم التي تم الحصول عليها بواسطة qPCR لتقييم تغير التعبير الجيني بين عينات الأساس والاستجابة ، باستخدام دلتا-دلتا- Cتي طريقة [53]. تظهر التغييرات في التعبير الجيني لكل عينة ، المقيسة للجينات المرجعية ، كقيم لتغيير الطية ، تمثل التغيير في الطية في SLC6A4 و NR3C1 بعد TSST بالنسبة لخط الأساس. ترد تفاصيل تحليلات qPCR وتسلسلات التمهيدي في ملف إضافي 1.

تحليل احصائي

تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام الإصدار 16.0 من SPSS لنظام التشغيل Windows (شيكاغو ، إلينوي ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، مع تعيين مستوى الأهمية عند α = .05. من أجل تقييم ما إذا كان TSST قد نجح في إثارة استجابة الكورتيزول ، استخدمنا مقاييس متكررة ANOVA لعينات اللعاب التسع التي تم جمعها خلال التجربة. قبل جميع التحليلات ، تم اختبار بيانات الكورتيزول للتوزيع الطبيعي بواسطة اختبار Kolmogorov-Smirnov. بسبب انتهاك الحالة الطبيعية للعينات في نقاط زمنية متعددة (ص & lt .05) ، تم تطبيق تحويل السجل على جميع بيانات الكورتيزول. بسبب انتهاك كروية (ص & lt .05) ، تم تطبيق تصحيح Greenhouse-Geisser.

لفحص الارتباطات بين متغيرات الاهتمام ، معامل ارتباط بيرسون (ص) للمتغيرات الموزعة بشكل طبيعي ، ومعامل سبيرمان rho (روبية) للمتغيرات غير الموزعة بشكل طبيعي. تم استخدام الارتباطات الجزئية حسب الضرورة للتحكم في تأثيرات بعض المتغيرات مثل العمر و خط 1 مثيلة.

من أجل فهم أنماط المثيلة عبر جزيرة CpG وتقليل عدد المتغيرات التي تم فحصها ، تم إجراء تحليل عامل يغطي 26 وحدة CpG عبر الجزيرة على غرار Olsson وآخرون. [41]. مقياس Kaiser-Meyer-Olkin لكفاية أخذ العينات (.834) واختبار Bartlett للكروية (ص & lt .001) أن تحليل العوامل مناسب لمجموعة البيانات. نتيجة للتحليل ، ظهرت خمسة عوامل توضح 75٪ من التباين. ومع ذلك ، نظرًا لأنه تم تحميل أقل من ثلاثة متغيرات على العاملين الأخيرين ، فقد تم اعتبار العوامل الثلاثة الأولى فقط: العامل 1 (F1) والعامل 2 (F2) والعامل 3 (F3). كانت النسبة المئوية للتباين التي أوضحها F1 و F2 و F3 هي 37 و 15 و 12 على التوالي. كانت عمليات التحميل على هذه العوامل بحيث تضمنت F1 بشكل أساسي وحدات CpG في بداية جزيرة CpG حتى بداية exon ، في حين تضمنت F2 تلك الموجودة في نهاية الجزيرة و F3 تضمنت منطقة أقصر في نهاية الجزيرة ( شكل 1).


المقدمة

تعد مراقبة جودة البروتين (PQC) أمرًا بالغ الأهمية للحفاظ على توازن البروتين في الخلايا حقيقية النواة. تم تحديد مسارات PQC الخاصة بالمقصورات الخلوية المتعددة ، بما في ذلك تلك المخصصة للبروتينات الخاطئة في العصارة الخلوية (Eisele and Wolf ، 2008 Heck وآخرون. ، 2010 Nillegoda وآخرون. ، 2010) ، النواة (Gardner وآخرون. ، 2005) ، غشاء البلازما (Zhao وآخرون، 2013) ، والغشاء الشبكي الإندوبلازمي (Vembar and Brodsky ، 2008). في الواقع ، توجد حتى مسارات PQC التي تهاجم منتجات الترجمة المعيبة عند خروجها من الريبوسوم (Bengtson and Joazeiro، 2010 Brandman وآخرون. ، 2012 Defenouillere وآخرون. ، 2013 فيرما وآخرون، 2013). ومع ذلك ، نظرًا للتنوع الهائل في بنية البروتين وتوطينه ، فمن المحتمل أن يكون فهمنا لـ PQC بعيدًا عن الاكتمال.

في مسح المناظر الطبيعية للتحديات التي تواجه التكوين الحيوي للبروتين ، نزلنا على الريبوسوم كهدف مثير للاهتمام للتحقيق الآلي لـ PQC. يعتبر تكوين الريبوسوم في الخميرة عملية معقدة تتطلب نسخ الرنا الريباسي 35S و 5S ، ومعالجة الرنا الريباسي الأولي 35S ، والترجمة والاستيراد النووي لـ 79 بروتينًا ريبوزوميًا مختلفًا ، وتجميع الرنا الريباسي المعالج والبروتينات الريبوزومية في النواة (كريسلر) وآخرون، 2010). إن تجميع الريبوسوم ليس معقدًا فحسب ، ولكنه يحتكر أيضًا جزءًا مثيرًا للإعجاب من القدرة الحيوية. في خلايا الخميرة سريعة النمو ، يتم تخصيص 60٪ من إجمالي النسخ للـ rRNA ، و 50٪ من نسخ RNA polymerase II و 90٪ من ربط mRNA لبروتينات الريبوسوم (Warner ، 1999). يضع هذا التدفق الهائل علاوة على آليات PQC الفعالة لتقليل تكوين وتراكم المكونات غير القابلة للاستخدام. ومع ذلك ، على الرغم من التوسع السريع في فهمنا لآليات تنظيم التماثل الساكن للريبوسومات المجمعة ، فإن آليات التماثل الساكن التي تراقب تجميع الريبوسوم وتساعد الخلايا على التعامل مع الأخطاء أو الاختلالات في عملية التجميع لا تزال غير مفهومة جيدًا.

يتعلق أحد الأسئلة البسيطة والعميقة حول تجميع الريبوسوم بكيفية تحكم الخلية في التعبير الجيني الريبوزومي لضمان الإنتاج المتكافئ لجميع البروتينات. اقترحت العديد من الدراسات أن بعض البروتينات الريبوسومية قد تكون زائدة عن الحد ، وتحافظ الخلية على مستوى مناسب من هذه البروتينات عن طريق تحطيم البروتينات غير المجمعة. إن وجود مثل هذه الآلية مدعوم بعدة أدلة. على سبيل المثال ، تتحلل البروتينات الريبوزومية المُصنَّعة حديثًا بسرعة عندما تتعطل معالجة الرنا الريباسي (غورنشتاين وورنر ، 1977 وارنر ، 1977). بالإضافة إلى ذلك ، في الخلايا التي تحتوي على نسخ إضافية من جين البروتين الريبوزومي ، لا يمكن الكشف عن الإفراط في إنتاج البروتين المقابل ما لم يتم إجراء توسيم نبضي قصير للغاية (∼45 ثانية) (Abovich وآخرون، 1985). بناءً على هذه الملاحظات ، تم اقتراح أن بعض بروتينات الريبوسوم يتم تصنيعها بشكل طبيعي عند مستويات تتجاوز ما تتطلبه الخلايا ، ولكن الكميات الزائدة تتحلل بسرعة ، بحيث لا تتراكم بشكل يمكن اكتشافه. ومع ذلك ، لم يتم استكشاف الآلية التي يتم من خلالها تحلل البروتينات الريبوزومية المفرطة الإنتاج. هذه الفرضية مدعومة بدراستين أخريين. تُظهر التجارب مع وضع العلامات على النظائر المستقرة النبضية باستخدام الأحماض الأمينية في زراعة الخلايا أن البروتينات الريبوزومية البشرية المُصنَّعة حديثًا يتم استيرادها بسرعة إلى النواة لتجميعها مع الرنا الريباسي ويتحلل الفائض بواسطة البروتيازوم (لام وآخرون. ، 2007). علاوة على ذلك ، في حين أن الحصول على كروموسوم إضافي في الخميرة يؤدي إلى زيادات متناسبة في مستويات الرنا المرسال والبروتين لمعظم الجينات الموجودة على الكروموسوم الإضافي (توريس) وآخرون. ، 2007 ، 2010) ، فإن معظم بروتينات الريبوسوم لا تزيد بشكل متناسب مع عدد النسخ ولكنها تضعف بعد الترجمة بآلية غير محددة (Dephoure وآخرون، 2014). يمكن لآليات متعددة أن تتوسط في تدهور بروتينات الريبوسوم الزائدة. في حين أن الدراسات البشرية تشير إلى البروتوزوم ، لم يتم تحديد ما إذا كان تدهور الوحدات الفرعية الريبوسومية التي لاحظها لام وآخرون. (2007) كان مرتبطًا بحالة التجميع أو يعتمد على الانتشار. في خلايا الخميرة ، تم ربط آليتين أخريين بعملية التمثيل الغذائي للريبوسوم. تغلف خلايا الخميرة المتعطشة للأحماض الأمينية الريبوسومات الناضجة الموجودة في البلعمة الذاتية في عملية يشار إليها باسم الريبوفاجي (كرافت وآخرون، 2008). بالإضافة إلى ذلك ، فإن خلايا الخميرة المعرضة للصدمة الحرارية تشكل حبيبات إجهاد تحتوي على 40S وحدة فرعية ، ويتم التخلص منها أيضًا عن طريق الالتهام الذاتي (Grousl وآخرون., 2009).

في هذه الدراسة ، نحقق في مصير البروتينات الريبوسومية التي يتم تصنيعها في فائض متكافئ على الوحدات الفرعية الريبوسومية الأخرى. لقد أثبتنا أن بروتينات الريبوسوم المفرطة الإنتاج تفشل إلى حد كبير في التجمع في الريبوسومات وبدلاً من ذلك تنتشر وتتحلل بسرعة في النواة بطريقة تعتمد على البروتيازوم.


يعترف المؤلفون بـ GS وعائلته لتعاونهم النشط والودي ، O. Sthandier و M. Marchioni للمساعدة التقنية ، D. Cacchiarelli للحصول على المشورة العلمية ، V. عينات و SMART من Servier (https://smart.servier.com/) لتصميم الشكل. تم دعم هذا العمل جزئيًا بمنح من ERC-2019-SyG (855923-ASTRA) و Telethon (GGP16213) و Parent Project Italia و AIRC (IG 2019 Id.23053) و PRIN 2017 (2017P352Z4) إلى I.B. وزارة الاقتصاد والصناعة والتنافسية الإسبانية (MEIC) (BFU2016-75008-P) إلى L.D.C.و Sapienza Research Calls (RM118164363B1D21) إلى J.M.

تم تنفيذ تصور وتصميم العمل من قبل JM و LDC و IB. تم إجراء التجارب وتحليلها بواسطة JM و ML و FC و AR و VDC و DM و TS و LP. تم إجراء تحليل بيانات المعلوماتية الحيوية بواسطة EB و AS و AC. تمت كتابة المسودة الأصلية للمخطوطة بواسطة JM و IB. تمت مراجعة المسودة وتحريرها من قبل جميع المؤلفين.


شاهد الفيديو: Delta Squad vs Torcher and Soldiers - Piggy (كانون الثاني 2022).